[發明專利]一種乳及乳制品中低分子肽的提取方法

有效

• 申請號: 201210292777.0
• 申請日: 2012-08-16
• 公開（公告）號: CN103183720A
• 公開（公告）日: 2013-07-03
• 發明（設計）人: 肖海龍;屠海云;林賽君;王紅青
• 申請（專利權）人: 杭州市質量技術監督檢測院
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14
• 代理公司: 杭州九洲專利事務所有限公司 33101
• 代理人: 王洪新

1.一種乳及乳制品中低分子肽的提取方法，按以下步驟進行：

1）初提

用緩沖液將生鮮乳稀釋1～5倍，或用緩沖液將乳粉稀釋5～15倍，用正己烷或乙醚—石油醚混合溶液去除脂類；接著采用超濾膜以及離心或抽濾的方式去除乳與乳制品中的高分子蛋白和其他顆粒物，得到低分子肽初提取液；乙醚—石油醚混合溶液中，乙醚的體積比例為30%～70%，其余是石油醚；

2）初凈化

將上述初提取液經過C18反相固相萃取柱的萃取；接著先用1%—5%的甲醇溶液或乙腈溶液洗去前述萃取柱上的強極性的雜質，然后用40%—70%的甲醇洗脫溶液或乙腈洗脫溶液將前述萃取柱上的低分子肽洗脫下來，收集洗脫溶液；最后蒸發掉洗脫溶液中的甲醇或乙腈，剩下的溶液即為低分子肽初凈化液；

3）再凈化

用鹽酸或硫酸或甲酸或乙酸溶液將獲得的初凈化液pH值調到2～4以內，以使低分子肽上的氨基“—NH₂”帶上H⁺變為“—NH₃⁺”；接著將前述溶液通過帶有負電荷基團的陽離子交換固相萃取小柱，以將低分子肽吸附并富集在該固相樹脂上；隨后，依次用酸性、中性洗滌液將不帶電荷的有機小分子物質和雜質洗滌掉，再用氨水甲醇溶液洗脫固相樹脂，使低分子肽上的“-NH₃⁺”重新成為不帶電荷的“-NH₂”狀態，并隨氨水甲醇溶液洗脫下來，收集洗脫液；

4）蒸發

洗脫液經過低溫氮吹至凈干，得到高純度的低分子肽混合物。

2.根據權利要求1所述的一種乳及乳制品中低分子肽的提取方法，其特征在于：所述步驟1）中的緩沖液是磷酸鹽緩沖液（PBS），或者是檸檬酸緩沖液，或者是NaCl溶液。

3.根據權利要求2所述的一種乳及乳制品中低分子肽的提取方法，其特征在于：所述超濾膜是截留分子量為5K的超濾膜。

4.根據權利要求3所述的一種乳及乳制品中低分子肽的提取方法，其特征在于：所述步驟2）中的甲醇洗脫溶液的成分為甲醇和水，其中甲醇的體積含量為40%～70%。

5.根據權利要求4所述的一種乳及乳制品中低分子肽的提取方法，其特征在于：所述步驟2）中的乙腈洗脫溶液的成分為乙腈和水，其中乙腈的體積含量為40%～70%。

6.根據權利要求5所述的一種乳及乳制品中低分子肽的提取方法，其特征在于：所述步驟3）中的酸性洗滌液為磷酸鹽緩沖液（PBS），或者是檸檬酸鹽緩沖液，或者是NaCl溶液，用鹽酸或硫酸或甲酸或乙酸溶液將其pH值調至2～4以內；

所述步驟3）中的中性洗滌液為磷酸鹽緩沖液（PBS），或者是檸檬酸鹽緩沖液，或者是NaCl溶液，pH在6.5～7.5以內。

7.根據權利要求6所述的一種乳及乳制品中低分子肽的提取方法，其特征在于：所述步驟3）中的氨水甲醇溶液的成分為甲醇和氨水，其中氨水的體積含量為2%～5%。