[發(fā)明專利]診斷奶牛隱性乳房炎的試劑、試紙條及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210292655.1
• 申請日: 2012-08-16
• 公開（公告）號: CN102818805A
• 公開（公告）日: 2012-12-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高利;肖建華;范洪剛;李艷飛;張建濤;魏成威;劉本軍;王洪斌
• 申請（專利權(quán)）人: 高利;肖建華;范洪剛
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 北京市德權(quán)律師事務(wù)所 11302
• 代理人: 余光軍

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種診斷試劑，尤其涉及一種診斷奶牛隱性乳房炎的試劑以及由該試劑制備成的試紙條，本發(fā)明進(jìn)一步涉及它們的制備方法及在臨床診斷奶牛隱性乳房炎中的應(yīng)用，屬于奶牛隱性乳房炎的診斷領(lǐng)域。

背景技術(shù)

奶牛乳房炎是奶牛業(yè)發(fā)病率最高、引起經(jīng)濟(jì)損失最嚴(yán)重的疾病之一。全世界每年僅乳房炎一項所造成的損失就高達(dá)350億美元，中國由于乳房炎所造成的損失每年約50多億美元。根據(jù)乳房和乳汁有無肉眼可見變化，奶牛乳房炎分為臨床型乳房炎和隱性乳房炎兩種類型。奶牛隱性乳房炎，一般不表現(xiàn)臨床癥狀或由于其臨床癥狀不明顯，難于發(fā)現(xiàn)而常常被人們所忽視，但其發(fā)病率極高，當(dāng)發(fā)展為臨床型乳房炎時，就失去最佳的治療時間。所以在奶牛隱性乳房炎階段及時作出診斷，可減輕其對奶牛乳腺的損傷及產(chǎn)奶量和奶質(zhì)的影響。據(jù)統(tǒng)計，中國隱性乳房炎陽性率為46.4-85.7%，奶牛隱性乳房炎的診斷一直是制約奶牛養(yǎng)殖業(yè)的難題。

國內(nèi)外對奶牛乳房炎的早期診斷均進(jìn)行了大量的研究，并取得了可喜的研究成果，但這些科研成果并沒有在基層得到很好的應(yīng)用與推廣，主要原因是理論與生產(chǎn)實際脫節(jié)或高昂的費用，基層難以承擔(dān)，如亞細(xì)胞水平方面的診斷與治療，技術(shù)高難，要求有專業(yè)人員開展相關(guān)工作，但基層缺乏這樣人員配備，所以無法推廣與實施；二是理論性強(qiáng)，不具備應(yīng)用價值，如機(jī)理方面的研究；三是監(jiān)測需要昂貴的設(shè)備與專業(yè)人員，而中國基層難以達(dá)到這一要求；四是費用太高，基層難以承擔(dān)，如一些生物學(xué)方面的檢測試劑盒及研發(fā)的新的抗生素藥物等。

國外關(guān)于隱性乳房炎診斷主要集中在體細(xì)胞監(jiān)測及對奶中成分的監(jiān)控，現(xiàn)在被美、德、法等許多國家作為監(jiān)測和控制奶牛隱性乳房炎的主要措施。如丹麥研制FossRBentley?SomacountCC-150型體細(xì)胞分析儀等，可以及時發(fā)現(xiàn)隱性乳房炎，但檢測設(shè)備和費用較高，不適合中國基層推廣應(yīng)用。在乳房炎診斷方面，國內(nèi)目前采用的是CMT法或CMT改良法，這些方法基本原理就是診斷液與乳汁混合后出現(xiàn)絮狀沉淀，根據(jù)沉淀的出現(xiàn)時間及量判斷乳房炎程度，這些方法一是存在主觀判斷不確定性，判斷標(biāo)準(zhǔn)難以精確界定，不同的人主觀標(biāo)準(zhǔn)不一樣，結(jié)果也不一樣，假陰性高；另一就是需要檢測人員具有一定的專業(yè)知識，也限制其臨床推廣應(yīng)用。故研制一種適合于基層工作人員使用的簡便、快捷、經(jīng)濟(jì)實惠的隱性乳房炎診斷試紙，對奶牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一是提供一種簡便、快捷、準(zhǔn)確的診斷奶牛隱性乳房炎的試劑；

本發(fā)明的目的之二是提供一種制備所述診斷奶牛隱性乳房炎試劑以及由該試劑所制備的診斷試紙條的方法。

本發(fā)明的上述目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：

一種診斷奶牛隱性乳房炎的試劑，包括以下組分：兒茶酚紫，中性紅，石蕊，耐爾藍(lán)A，α－萘酚苯甲醇；

優(yōu)選的，各組分的重量份是：兒茶酚紫0.2-2份，中性紅1-10份，石蕊20-80份，耐爾藍(lán)A?5-20份，α－萘酚苯甲醇1-10份；

更優(yōu)選的，各組分的重量份是：兒茶酚紫0.5-1.5份，中性紅2-8份，石蕊40-60份，耐爾藍(lán)A?8-15份，α－萘酚苯甲醇2-8份；

最優(yōu)選的，各組分的重量份是：兒茶酚紫1份，中性紅5份，石蕊50份，耐爾藍(lán)A?10份，α－萘酚苯甲醇5份。

本發(fā)明中所述的“兒茶酚紫”又名為“鄰苯二酚紫”。

本發(fā)明中所述“中性紅”的學(xué)名是“3-氨基-7-甲氨基-2-甲基吩嗪鹽酸鹽”，是細(xì)胞活體染色和酸堿性指示劑的一種堿性吩嗪染料。

本發(fā)明中所述耐爾藍(lán)A又名為硫酸尼羅藍(lán)。

本發(fā)明中所用到的所有組分或原料都能通過商業(yè)途徑購買得到，其規(guī)格符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。

本發(fā)明提供了一種由所述診斷奶牛隱性乳房炎試劑制備得到診斷液的方法，包括以下步驟：

（1）將兒茶酚紫以及中性紅分別用水溶解，備用；

（2）將耐爾藍(lán)A以及α－萘酚苯甲醇分別用冰醋酸溶解，備用；

（3）將石蕊用乙醇回流煮沸，靜置，傾去上層清液；將下層沉淀再用相同方法處理2次；殘渣用水洗滌，傾去水洗液，再加水煮沸，放冷，濾過得石蕊溶液，備用；

（4）將步驟（1）、（2）和（3）所得到的五種備用液混均，調(diào)整pH至7.2-7.5，加水定容，靜置，即得。

其中，步驟（3）中所述的乙醇優(yōu)選為濃度95％的乙醇40mL；所述的回流煮沸時間優(yōu)選為1小時。