[發明專利]一種生產人源化抗體或抗原結合片段的方法

有效

• 申請號: 201210292518.8
• 申請日: 2012-08-16
• 公開（公告）號: CN103588876B
• 公開（公告）日: 2018-11-09
• 發明（設計）人: 張劍冰;武術;章方良
• 申請（專利權）人: 南京傳奇生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N15/70
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 夏平;傅婷婷

1.一種生產人源化抗體或抗原結合片段的方法，包括：

（1）獲得非人類生物針對某一抗原的抗體的重鏈可變區和輕鏈可變區序列，

（2）將非人源抗體重鏈可變區和輕鏈可變區的氨基酸序列與人胚系抗體的氨基酸序列對比，

（3）分別選擇與非人源抗體重鏈可變區和輕鏈可變區同源性最高的人胚系抗體氨基酸序列，

（4）構建人胚系抗體重鏈可變區框架的文庫，包含編碼多個重鏈可變區的核酸序列，其中每個重鏈可變區包含框架1、框架2、框架3和框架4，所述的每一個核酸序列獨立地選自同源的人胚系抗體重鏈可變區的相應框架區和非人源抗體的互補決定區，

（5）構建人胚系抗體輕鏈可變區框架的文庫，包含編碼多個輕鏈可變區的核酸序列，其中每個輕鏈可變區包含框架1、框架2、框架3和框架4，每一個核酸序列獨立地選自同源的人胚系抗體輕鏈可變區的相應框架區和非人源抗體的互補決定區，

（6）將所述的人胚系抗體重鏈可變區框架文庫和輕鏈可變區框架文庫組裝為完整的框架組裝文庫，

（7）表達所述的框架區組裝文庫，

（8）通過ELISA方法檢測噬菌體與抗原結合能力，或在相似條件下擴增淘篩后噬菌體并開始隨后兩輪次的篩選；不止一個的人源化抗體重鏈可變區、輕鏈可變區從框架區組合庫中篩出；在大腸桿菌TG1細胞中擴增從淘篩獲得的噬菌體，隨后制備噬菌粒，將噬菌粒載體中的Fab片段亞克隆到FASEBA載體中用于隨后的表達篩選；經FASEBA系統篩選后，采用親和力排序來進一步分離對抗原具有高親和力的抗體；

（9）制備包含人源化重鏈可變區和輕鏈可變區的人源化抗體或抗原結合片段。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于至少一個人源化的重鏈可變區和人源化的輕鏈可變區在宿主細胞中表達水平> 5mg/L。

3.根據權利要求1-2中任一項所述的方法制備的人源化抗體或抗原結合片段。

4.包含權利要求3所述的人源化抗體或抗原結合片段的組合物。