[發(fā)明專利]分離富集并檢測水環(huán)境中痕量氟喹諾酮類抗生素的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210289863.6
• 申請日: 2012-08-15
• 公開（公告）號(hào): CN102798689A
• 公開（公告）日: 2012-11-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐勇鵬;崔鵬;王媛
• 申請（專利權(quán)）人: 哈爾濱工業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N30/88
• 分類號(hào): G01N30/88;G01N30/08
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• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種分離富集和檢測水環(huán)境中痕量氟喹諾酮類抗生素殘留的方法，尤其涉及一種以膜過濾及固相萃取作為前處理，基于液質(zhì)聯(lián)用法分離富集和檢測水環(huán)境中氟喹諾酮類抗生素殘留的方法。

背景技術(shù)

抗生素類藥物在環(huán)境中殘留所引發(fā)的環(huán)境污染問題，近年來備受人們的關(guān)注。在人禽的醫(yī)療中廣泛使用的氟喹諾酮類（FQs）抗生素如：環(huán)丙沙星（CIP）、恩諾沙星（ENR）、諾氟沙星（NOR）和氧氟沙星（OFL），由于具有水溶性較好、動(dòng)物體內(nèi)代謝率較低，以及在環(huán)境中不易降解等特點(diǎn)，使其容易在水環(huán)境中不斷富集和儲(chǔ)存，是環(huán)境中主要抗生素污染源。由于其含量極低（納克級(jí)），因此，建立相應(yīng)的分離富集技術(shù)及檢測方法十分必要。目前對水環(huán)境樣品中的抗生素分析常用固相萃取分離富集作為前處理方法。雖然抗生素種類繁多，但其化學(xué)性質(zhì)相似，檢測方法總體可以歸為3大類：化學(xué)測定法、色譜測定法和免疫測定法。其中，酶聯(lián)免疫法試樣預(yù)處理簡單、特異性強(qiáng)，但由于抗體的批次不同，測定結(jié)果可能出現(xiàn)微小差異，靈敏度不高；其他微生物法易操作，費(fèi)用低，可用于大量樣品的篩選，但是靈敏度不高，且特異性差；HPLC-UV/FLU法儀器操作方便，樣品前處理簡單，靈敏度高；LC-MS/MS法樣品前處理簡單，選擇性好，靈敏度高，檢測限低，基本可應(yīng)用于任何低含量物質(zhì)的檢測。

固相萃取技術(shù)是一種發(fā)展迅猛的樣品前處理技術(shù)，Oasis?HLB固相萃取小柱具有較好親水親油平衡性，在水體基質(zhì)中對氟喹諾酮類抗生素物質(zhì)具有較好的吸附能力。合理選擇溶劑處理萃取小柱后可以實(shí)現(xiàn)對水樣中氟喹諾酮類抗生素的富集與純化。液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)是當(dāng)前使用較為廣泛的儀器分析技術(shù)之一，具有液相色譜高分離能力和質(zhì)譜精準(zhǔn)定性定量的共同優(yōu)勢，通過對液相條件與質(zhì)譜條件的優(yōu)化，能夠準(zhǔn)確分析檢測經(jīng)過前處理后的水樣中目標(biāo)物的含量。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種新的分離富集并檢測水環(huán)境中痕量氟喹諾酮類抗生素的方法，該方法具有低檢測限、高回收率、高靈敏度、選擇性好且操作簡便等優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種分離富集和檢測水環(huán)境中氟喹諾酮類抗生素殘留的方法，是將2.0-4.0L水樣通過固相萃取后，用液相質(zhì)譜串聯(lián)四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（LC-MS/MS(Q-TOF)）進(jìn)行分析檢測。

上述所說的方法中，所述固相萃取方法為：用2-4ml甲醇、2-4ml超純水依次活化固相萃取小柱，將2.0-4.0L水樣以4.0-6.0mL/min的流速通過活化后的固相萃取小柱，用5-8mL磷酸、5-8mL超純水依次淋洗小柱；然后真空干燥小柱5-10min，用2-4mL甲醇洗脫，洗脫液用氮?dú)獯抵?mL以下，倒入安捷倫小瓶后再用甲醇定容至1mL；加入0.5-1.0mL內(nèi)標(biāo)物。

上述所說的方法中，固相萃取小柱選用的是Oasis?HLB。

上述所說的方法中，通過質(zhì)譜圖中離子強(qiáng)度值和內(nèi)標(biāo)法定量，內(nèi)標(biāo)物選用的是沙拉沙星、洛美沙星或左氧氟沙星。

其原理如下：

前處理部分：Oasis?HLB固相萃取小柱具有較好親水親油平衡性，在水體基質(zhì)中對氟喹諾酮類抗生素物質(zhì)具有較好的吸附能力。通過選擇性吸附目標(biāo)物，使其保留在柱填料中得以純化和富集，再通過淋洗去除同時(shí)保留的部分其它雜質(zhì)，進(jìn)一步純化目標(biāo)物，最后以有機(jī)溶劑將之從柱填料洗脫到溶劑中。

儀器分析部分：用高精度分析儀器準(zhǔn)確檢測，其中通過液相的良好分離能力將多種目標(biāo)物分離，再通過質(zhì)譜的精準(zhǔn)定性定量能力，通過內(nèi)標(biāo)法得到其準(zhǔn)確含量值。

本發(fā)明融合了固相萃取良好富集提純能力與液質(zhì)聯(lián)用儀器高分離定性定量能力，以及加入標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)標(biāo)物精確定量的特點(diǎn)，使得分析河水、湖泊水甚至自來水中極其痕量的氟喹諾酮類抗生素效果顯著。

總之，本發(fā)明能很好的分離檢測多種氟喹諾酮類抗生素物質(zhì)，具有低檢測限、高回收率、高靈敏度、選擇性好且操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，對水環(huán)境中痕量氟喹諾酮類抗生素物質(zhì)的檢測研究效果顯著。

附圖說明

圖1為過柱流速對回收率的影響；

圖2為洗脫劑體積對回收率的影響；

圖3為萃取體積對回收率的影響；

圖4為四種氟喹諾酮類抗生素離子譜圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施實(shí)例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。

實(shí)施例1：固相萃取條件的選擇

一、活化劑選擇：