[發明專利]有尾兩棲動物新疆北鯢皮膚分泌物的提純方法與應用

有效

• 申請號: 201210288852.6
• 申請日: 2012-08-14
• 公開（公告）號: CN102764273A
• 公開（公告）日: 2012-11-07
• 發明（設計）人: 袁亮;王秀玲;葉小芳;周克夫;蔡報偉;王晗;季榮
• 申請（專利權）人: 新疆師范大學;廈門大學
• 主分類號: A61K35/56
• 分類號: A61K35/56;A61P35/00
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所 35200
• 代理人: 馬應森

技術領域

本發明涉及一種屬于生物醫學領域，具體涉及分布于新疆的一種有尾兩棲動物——新疆北鯢（Ranodon?sibiricus）皮膚分泌物的提純方法以及該分泌物在抗腫瘤方面的應用。

背景技術

兩棲動物皮膚裸露、潮濕，易受外界環境作用。在長期進化中，該類生物皮膚腺高度進化且發達，其作用除保持身體濕潤外，對抵抗微生物、病毒、甚至天敵的侵害至關重要。兩棲類皮膚腺幾乎遍布周身，可分為三類：粘液腺、顆粒腺、泡狀腺，前兩類皮膚腺占絕大多數（賴仞等.兩棲類皮膚活性肽與活性生物胺[J].大自然探索,1999,18(67):71-74）。粘液腺分布全身體表，分泌出清澈粘液，覆蓋在身體表面形成一層濕潤的薄膜，具有防御、繁殖、保濕、皮膚呼吸、溫度調節、pH調節等作用；顆粒腺作為兩棲類特有的一種毒腺，主要分布于背部和尾部（有尾類），研究發現，其分泌物有防御功能，含有復雜的生物活性物質，具有特殊的生理和藥理作用，也是作為中藥材的物質基礎。

上世紀70年代人們開始從兩棲類皮膚分泌液中尋找具有藥用價值的活性物質，主要以篩選具抗菌及抗腫瘤功效的活性物質為主。其中抗菌肽成為熱點研究物質，該類物質是一類氨基酸數量較少的具有抗菌作用的小肽蛋白質，由于不僅具有毒副作用小、熱穩定性好、抗菌譜廣等特點，而且其抗菌機理不同于普通抗生素，不易產生抗藥菌株，有望成為新一代的抗細菌、抗病毒及抗癌藥物的新來源（姜麗麗等.蛙類皮膚及其分泌物中生物活性肽的研究進展[J].中國生化藥物雜志,2005.26(4):246-249）。美國費城馬蓋寧制藥公司于1990年開始對青蛙皮膚抗菌肽進行結構與分子設計，篩選出一種對病毒和腫瘤細胞均有殺傷作用的小肽MA1-78。兩棲類已被認為是一種極有開發前景的藥物資源庫（Clarke?B?T.1997.The?nature?history?of?amphibian?skin?secretions,their?normal?function?and?potential?medical?applications[J].Biol.Rev，72(3):365-379）

新疆北鯢（Ranodon?sibiricus）又名中亞北鯢、西伯利亞鯢，隸屬兩棲綱，有尾目，小鯢科，北鯢屬，是新疆產唯一的有尾兩棲動物，僅分布在中國新疆和哈薩克斯坦邊境地區的西天山分支及阿拉套山一帶，棲息地海拔介于2100～3200m的山間泉水小溪中。新疆北鯢的生存條件惡劣：除高緯度、高海拔、高寒等地理氣候環境外，在其生活的溪水和岸邊有大量枯枝敗葉、水綿青苔、腐殖質；不時有牛羊經過飲水，還在其棲息地排下糞便；新疆北鯢越冬也主要棲息在棲息地周圍的地下暗泥石流中，這些都是導致微生物繁衍滋生的有利條件，而新疆北鯢在這種環境中生存，并存活至今，其皮膚在適應環境、繁衍進化、抑制微生物滋生等方面起到重要作用。

在人工飼養新疆北鯢時，每當用手抓完新疆北鯢后，其皮膚分泌的粘性物質很難從手上洗去，且保留時間較長。吳敏等（吳敏等.新疆北鯢皮膚組織學觀察[J].兩棲爬行動物學研究,1995,(4,5):39-42）對新疆北鯢皮膚的組織學進行了觀察，結果表明，其皮膚不僅有豐富的粘液腺體，在背、尾部還布滿了顆粒腺體。

發明內容

本發明的目的在于提供一種具備抗腫瘤的有尾兩棲動物新疆北鯢（Ranodon?sibiricus）皮膚分泌物的提純方法與應用。

所述有尾兩棲動物新疆北鯢皮膚分泌物的提純方法如下：

1）將新疆北鯢皮膚分泌物用雙蒸水沖洗并收集，采用抽濾方法去除雜質；

2）將去除雜質的新疆北鯢皮膚分泌物收集液冷凍后，干燥，濃縮，制成新疆北鯢皮膚分泌物干粉；

在步驟2）中，所述冷凍的條件可為置于－80℃超低溫冰箱冷凍24h；所述干燥可采用真空干燥。

3）將新疆北鯢皮膚分泌物干粉保存在冰箱中，應用前PBS溶解后用細菌過濾膜過濾除菌，分裝后保存于－20℃冰箱備用。

所述有尾兩棲動物新疆北鯢皮膚分泌物對腫瘤細胞的生長具有顯著的體外抑制作用，可用于制備抗腫瘤藥物，尤其是制備抗肺癌、子宮頸癌和肝癌等藥物。具體說明本發明實現的藥效和潛在效果如下：