[發(fā)明專利]一種從赭色小莫勒菌中提取杜斯塔寧的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210288827.8
• 申請日: 2012-08-15
• 公開（公告）號: CN102838650A
• 公開（公告）日: 2012-12-26
• 發(fā)明（設計）人: 邱君志;毛麗慧;宋飛飛;邱云鋒;關雄;涂潔;張偉;謝小聰
• 申請（專利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學
• 主分類號: C07J63/00
• 分類號: C07J63/00
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

技術(shù)領域

本發(fā)明涉及一種從赭色小莫勒菌中提取杜斯塔寧的方法。?

?背景技術(shù)

??????赭色小莫勒菌（Moelleriella?ochracea）為子囊菌門、分菌綱、肉座菌目、麥角菌科、莫勒菌屬，它是粉虱的重要病原真菌，以往充分利用其對粉虱的自然控制作用，在生物防治方面取得了顯著效果，隨著對該菌研究的全面深入，人們已從其代謝產(chǎn)物中分離、純化出一些有活性的物質(zhì)，如杜斯塔寧，其分子式C₃₀H₅₀O₂，分子量444，是三萜類五元碳環(huán)物質(zhì)，具有抗結(jié)核桿菌的作用，IC₅₀=12.5ug/ml，可見，莫勒菌在醫(yī)學上具有潛在的應用價值。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是公開一種從赭色小莫勒菌中提取杜斯塔寧的方法，以促進其藥理學的進一步研究和臨床上更好的開發(fā)和應用。?

本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下：?

一種從赭色小莫勒菌中提取杜斯塔寧的方法，包括以下步驟：

1）赭色小莫勒菌活化后，取菌塊接種PDB培養(yǎng)基中，在120～160r/min、20～28℃條件下連續(xù)培養(yǎng)5～10天即初級培養(yǎng)，按8％～10％接種量再次轉(zhuǎn)接到PDB培養(yǎng)基中，繼續(xù)在120～160r/min、20～28℃條件下連續(xù)培養(yǎng)25～30天即次級培養(yǎng)；

2）將菌液和菌絲體分離，菌絲體在28-35℃下干燥后研磨成粉狀，加1～2倍體積的乙酸乙酯浸泡10～14小時，超聲20～40分鐘，浸泡液旋蒸得菌絲體浸膏，回收乙酸乙酯；菌液用乙酸乙酯萃取，萃取液旋蒸濃縮得菌液浸膏，回收乙酸乙酯；

3）將菌絲體浸膏和菌液浸膏合并，上200～300目硅膠柱，以石油醚和丙酮梯度洗脫，收集石油醚：丙酮體積比=20:1部分洗脫液，旋蒸濃縮，氯仿溶解，溶解液自然揮干，再經(jīng)甲醇重結(jié)晶得杜斯塔寧。

所述菌液用乙酸乙酯萃取具體操作為：將菌液與乙酸乙酯按體積比1：1混合，倒入分液漏斗中，搖瓶萃取20～40min，靜止12～24小時，萃取1-3次。?

所述超聲的功率為300～500W，頻率為30～40KHz。?

所述PDB培養(yǎng)基的制備為：200g馬鈴薯，20g葡萄糖，沸水煮30min，經(jīng)4層紗布過濾后加單蒸水定容至1L。?

本發(fā)明的顯著優(yōu)點：?

1）????????????原料取材簡單；

2）????????????提取步驟簡單，成本低；

3）????????????制得的化合物純度高。

附圖說明

圖1為提取的杜斯塔寧的純度驗證圖。?

具體實施方式

實施例1

1）?取赭色小莫勒菌（邱君志等，赭色小莫勒菌在中國的發(fā)現(xiàn).?菌物學報，2009.28(1):?148-150）為材料，無菌條件下挑取長寬約為1cm的菌塊到PDB培養(yǎng)基（200g馬鈴薯，20g葡萄糖，沸水煮30min，經(jīng)4層紗布過濾后加單蒸水定容至1L，分裝到250ml三角瓶中，每瓶裝100ml，在121℃高壓下滅菌25min）中，在160r/min、25℃條件下連續(xù)培養(yǎng)8天即初級培養(yǎng)，按9％接種量再次轉(zhuǎn)接到PDB培養(yǎng)基中，繼續(xù)在160r/min、25℃條件下連續(xù)培養(yǎng)28天即次級培養(yǎng)；

2)??????????將菌液和菌絲體分開，菌絲體在室溫下干燥之后研磨成粉狀，加2倍體積（w/v）的乙酸乙酯浸泡12小時，超聲30分鐘，浸泡液旋蒸得浸膏，回收乙酸乙酯；將菌液與乙酸乙酯按體積1：1混合、倒入分液漏斗中，搖瓶萃取30min，靜止16小時，倒出乙酸乙酯，將其旋蒸濃縮得菌液浸膏，回收乙酸乙酯。

3)????????????合并菌液浸膏和菌絲體浸膏，氯仿溶解浸膏，上200目硅膠柱，以石油醚：丙酮體積比=50-10:1梯度洗脫，收集石油醚：丙酮體積比=20:1部分洗脫液。旋蒸濃縮，氯仿溶解洗出，自然揮干，甲醇重結(jié)晶得赭色小莫勒菌中的杜斯塔寧。?