[發明專利]DNA甲基化的檢測探針、檢測方法及檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201210288700.6
• 申請日: 2012-08-14
• 公開（公告）號: CN103589777A
• 公開（公告）日: 2014-02-19
• 發明（設計）人: 張春陽;曹岸萍
• 申請（專利權）人: 中國科學院深圳先進技術研究院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 吳平

1.一種DNA甲基化檢測探針，其特征在于，包括5’端和3’端的用于與甲基化DNA互補配對的序列以及中間部分的用于引發超分支滾環擴增反應的特異性序列，其中，檢測探針3’端的最后一個堿基為鳥嘌呤，所述鳥嘌呤與甲基化DNA中部的甲基化胞嘧啶配對，且檢測探針3’端的序列與甲基化DNA的自中部所述甲基化胞嘧啶至3’端的序列反向互補配對，檢測探針5’端的序列與甲基化DNA的自中部所述甲基化胞嘧啶的臨近脫氧核苷酸至5’端的序列反向互補配對。

2.根據權利要求1所述的DNA甲基化檢測探針，其特征在于，所述檢測探針的DNA序列是SEQ?ID?NO:1。

3.一種DNA序列為SEQ?ID?NO：1的檢測探針在檢測人類非小細胞肺癌細胞系基因組甲基化程度中的應用。

4.一種DNA甲基化的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

用亞硫酸氫鹽處理待測DNA，使所述待測DNA中未甲基化的胞嘧啶轉化成尿嘧啶；

向亞硫酸氫鹽處理后的待測DNA中加入如權利要求1所述的檢測探針進行DNA融合反應；

向融合反應得到的產物中加入DNA連接酶，進行連接反應；

使用超分支滾環擴增方法擴增上步驟得到的產物并進行光譜信號檢測。

5.根據權利要求4所述的DNA甲基化檢測方法，其特征在于，所述亞硫酸氫鹽為亞硫酸氫鈉或亞硫酸氫鉀。

6.根據權利要求4所述的DNA甲基化的檢測方法，其特征在于，還包括在融合反應后向融合反應后得到的產物中加入DNA消化液，消化未完全互補配對的DNA序列的步驟。

7.根據權利要求4所述的DNA甲基化檢測方法，其特征在于，所述進行光譜信號檢測是將超分支滾環擴增后的DNA產物與SYBR?Green?I熒光染料混合，在熒光光度計下檢測混合物的發射波強度。

8.一種人類非小細胞肺癌檢測試劑盒，其特征在于，包括檢測探針，所述檢測探針的DNA序列是SEQ?ID?NO:1。

9.根據權利要求8所述的人類非小細胞肺癌檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括超分支滾環擴增引物，所述超分支滾環擴增的正向引物的DNA序列和反向引物的DNA序列分別為SEQ?ID?NO:3和SEQ?ID?NO:4。