[發(fā)明專利]一株凝結(jié)芽孢桿菌及其在動(dòng)物消化道中后腸段模擬裝置中厭氧代謝、產(chǎn)乳酸的快捷鑒定

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210287843.5
• 申請日: 2012-08-14
• 公開（公告）號: CN103589654A
• 公開（公告）日: 2014-02-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅國升;劉亞力;張煌
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南普菲克生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12M1/00;C12Q1/04;C12R1/07
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種能在體外環(huán)境下模擬動(dòng)物消化道中后腸段厭氧環(huán)境的并用于微生態(tài)制劑菌株鑒定的簡易裝置，特別是涉及一種凝結(jié)芽孢桿菌在動(dòng)物消化道中后腸段模擬裝置中厭氧代謝、產(chǎn)乳酸的快捷篩選和鑒定的定性、定量方法。?

背景技術(shù)

?微生態(tài)制劑領(lǐng)域中的活菌制劑類飼料添加劑，具有調(diào)節(jié)腸道功能紊亂、維持腸道內(nèi)菌群平衡、促進(jìn)生長和提高機(jī)體免疫力等作用，且能夠減少服用抗生素帶來的耐藥性、二重感染及藥物殘留等問題，已被廣泛地應(yīng)用于畜牧及水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。活菌制劑類飼料添加劑所涉及的微生物菌株種類繁多，包括各種芽孢桿菌、乳酸桿菌、糞鏈球菌、屎鏈球菌、雙歧桿菌、酵母菌等；但作為一種飼料添加劑，首先必須對高溫制粒等飼料加工工藝有足夠的抵抗力，而各類有益微生物菌株中只有芽孢桿菌的芽孢制劑才具備此能力，所以，多年來真正得到廣泛應(yīng)用的活菌制劑類飼料添加劑是枯草、地衣、蠟樣等芽孢桿菌(包海泉，2004；付殿國和徐明，2005；莊俊峰等，2006；曹曉敏，2009)。?

菌株的篩選和活性的測定是活菌制劑類飼料添加劑研究、開發(fā)中的關(guān)鍵問題之一，決定微生態(tài)制劑的使用效果。此領(lǐng)域目前研究工作的現(xiàn)狀是圍繞著菌株是否能耐胃酸、耐高膽鹽、耐抗生素(趙新海，2003；閔鐘熳，2007；曹曉敏，2009)，是否具有對大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等有害微生物的抑菌圈(閔鐘熳，2007；曹曉敏，2009)，是否可以發(fā)酵產(chǎn)酶(龍燕，2007；曹曉敏，2009；羅碧毅等，2009)等方面展開。雖然這些篩選菌株的指標(biāo)是一株優(yōu)秀的微生態(tài)制劑菌株所必備的，但有一個(gè)前提條件無人問津，那就是菌株在動(dòng)物消化道發(fā)揮主要作用的“中后腸段”之厭氧環(huán)境中能否進(jìn)行正常的生理代謝。一株再好的菌株如果不能夠在動(dòng)物腸道中后段的厭氧環(huán)境中進(jìn)行正常代謝活動(dòng)，那么此菌株又怎能去抑制有害菌？怎能產(chǎn)酶去促進(jìn)消化？怎能去發(fā)揮提高免疫力等等益生作用？另一方面，可在動(dòng)物消化道中后腸段厭氧代謝的益生菌，最好且為行業(yè)所公認(rèn)的代謝產(chǎn)物之一是乳酸等。所以，活菌制劑類飼料添加劑在抗逆性強(qiáng)這一先決條件的基礎(chǔ)上，若要發(fā)揮除“微生物奪氧”以外更多的益生作用而實(shí)現(xiàn)使用效果得到大幅度提高的產(chǎn)業(yè)升級目的，其前提之一是篩選出能夠在動(dòng)物消化道中后腸段擁有可厭氧代謝、產(chǎn)乳酸等特征的有益微生物菌株。為此，需要一套能夠模擬動(dòng)物腸道中后段無氧環(huán)境的簡便裝置，并借此進(jìn)行益生菌株的厭氧代謝、產(chǎn)乳酸等定性、定量的篩選和鑒定工作。?

凝結(jié)芽孢桿菌在我國是一種相對新興的活菌制劑類飼料添加劑可使用菌株，它既具備乳酸桿菌耐酸、厭氧代謝、產(chǎn)乳酸的一切優(yōu)良特征，又具備芽孢桿菌耐高溫、耐酸等特征。凝結(jié)芽孢桿菌可以以芽孢形式順利克服飼料制粒的高溫破壞并通過胃酸環(huán)境，進(jìn)入到腸道后會(huì)進(jìn)行腸道繁殖消耗游離氧，還可以厭氧代謝產(chǎn)乳酸而直接抑制有害菌等，較之不產(chǎn)酸的芽孢桿菌更益于恢復(fù)腸道微生態(tài)平衡。凝結(jié)芽孢桿菌還能通過對動(dòng)物消化道菌群和體內(nèi)消化酶的影響，提高動(dòng)物自身對體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力。因此它有望成為活菌制劑類飼料添加劑領(lǐng)域的產(chǎn)業(yè)升級菌株，代表了一種發(fā)展方向。

本發(fā)明提供一株凝結(jié)芽孢桿菌，同時(shí)提供一種模擬動(dòng)物腸道中后腸段厭氧環(huán)境的簡易裝置，建立一個(gè)微生態(tài)制劑在動(dòng)物消化道中后腸段厭氧代謝產(chǎn)物的快捷鑒定方法，并建立一套完整的用于口服微生態(tài)制劑菌種篩選和鑒定的定性、定量方法，旨在提高微生態(tài)制劑菌種篩選的效率，提高微生態(tài)制劑的可實(shí)用性，為動(dòng)物微生態(tài)制劑產(chǎn)業(yè)升級奠定基礎(chǔ)。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種模擬動(dòng)物中后腸段厭氧環(huán)境的簡易裝置。?

簡易裝置如圖1所示，由4部分組成：1密封塞，2液體石蠟密封層，3培養(yǎng)基，4玻璃瓶。此裝置可有效提供厭氧環(huán)境，具體操作如下：密封塞是用硅膠塞和封口膜組成，液體石蠟為無菌液體，培養(yǎng)基為MRS培養(yǎng)基加入0.1～0.2％(w/V)的硫代乙醇酸鈉(HSCH2COONa)和少量美藍(lán)指示劑的混合液，玻璃瓶為醫(yī)用點(diǎn)滴瓶。硫代乙醇酸鈉是一種還原劑，加入培養(yǎng)基中，能除去其中的氧或還原性物質(zhì)，提供厭氧環(huán)境。培養(yǎng)基中加入少量美藍(lán)液作為氧化還原的指示劑，在無氧條件下，美藍(lán)被還原成無色；反之，培養(yǎng)基呈藍(lán)色說明有氧氣存在。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比存在以下優(yōu)點(diǎn)：

1、提供了一種簡易裝置模擬動(dòng)物消化道中后腸段厭氧環(huán)境，本發(fā)明成本低廉，操作簡單。

2、本發(fā)明是模擬微生物在動(dòng)物消化道中后腸段的生長代謝活動(dòng)，可有效檢測微生物在厭氧環(huán)境中的代謝產(chǎn)物。

本發(fā)明還提供一株能夠在厭氧條件下發(fā)酵葡萄糖生產(chǎn)乳酸的凝結(jié)芽孢桿菌。?