[發(fā)明專利]一種昆崳林蛙抗菌肽Kunyuenin及其制備和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210287508.5
• 申請(qǐng)日: 2012-08-13
• 公開（公告）號(hào): CN102796176A
• 公開（公告）日: 2012-11-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王義鵬;于海寧;秦松
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院煙臺(tái)海岸帶研究所
• 主分類號(hào): C07K7/08
• 分類號(hào): C07K7/08;C12N15/12;A61K38/10;A61K8/64;A61P31/04
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體的說是一種昆崳林蛙抗菌肽Kunyuenin及其制備和應(yīng)用。

背景技術(shù)

隨著青霉素等傳統(tǒng)抗生素的大規(guī)模和不恰當(dāng)使用，微生物對(duì)傳統(tǒng)抗生素產(chǎn)生了越來越強(qiáng)的耐受性，在臨床上已經(jīng)出現(xiàn)了大量能夠完全耐受青霉素等傳統(tǒng)抗生素的微生物，已有的抗生素對(duì)這些病原微生物無能為力。抗菌肽是一種新型的抗微生物多肽，大多數(shù)抗菌肽分子量小于10000Da，帶正電，富含疏水堿基，能夠形成兩親性的結(jié)構(gòu)。抗菌肽的殺菌機(jī)制主要是通過靜電相互作用吸引并結(jié)合到帶負(fù)電的細(xì)菌細(xì)胞膜表面，進(jìn)一步在細(xì)菌細(xì)胞膜上形成跨膜的孔洞，導(dǎo)致細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)容物的外泄，從而導(dǎo)致細(xì)菌細(xì)胞的死亡。而傳統(tǒng)抗生素主要是作用于細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)的一些酶類。正是由于作用方式的不同，抗菌肽介導(dǎo)的殺菌作用遠(yuǎn)遠(yuǎn)快于傳統(tǒng)抗生素，并且不易使細(xì)菌產(chǎn)生耐受性。除此之外，越來越多的文獻(xiàn)報(bào)道表明抗菌肽還具有其他的殺菌機(jī)制，如抑制細(xì)菌細(xì)胞壁合成、改變細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)膜抑制隔膜形成、激活自溶素、抑制細(xì)胞內(nèi)酶活性、抑制DNA、RNA和蛋白質(zhì)的合成等。

兩棲類動(dòng)物作為水生和陸生動(dòng)物的中間類群，其生活環(huán)境惡劣，容易滋生各種病原微生物。為了避免微生物感染，兩棲類動(dòng)物進(jìn)化出強(qiáng)大的先天免疫系統(tǒng)，用以抵抗病原微生物的侵襲。其中抗菌肽是兩棲類動(dòng)物先天免疫系統(tǒng)中的重要組分，在兩棲類動(dòng)物抵御外界微生物侵襲過程中發(fā)揮了重要的作用。到目前為止，已從各種兩棲類動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)大量抗菌肽，這些抗菌肽具有不同的結(jié)構(gòu)和抗菌活性，是新型多肽類抗微生物藥物開發(fā)的優(yōu)良模板庫。目前，國(guó)外對(duì)多種兩棲類抗菌肽進(jìn)行了研究開發(fā)，已有多種進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。如來源于非洲爪蟾抗菌肽magainin的改造體MSI-78對(duì)糖尿病患者的足部潰瘍有顯著療效且副作用小，已進(jìn)入臨床Ⅲ期試驗(yàn)階段。

昆崳林蛙（Rana?kunyuensis)屬于兩棲綱無尾目蛙科蛙屬，為中國(guó)特有種，僅分布于山東省煙臺(tái)市昆崳山。目前關(guān)于昆崳林蛙形態(tài)、發(fā)育和分子進(jìn)化已有報(bào)道，但是關(guān)于昆崳林蛙抗菌肽的研究還沒有報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種昆崳林蛙（Rana?kunyuensis)抗菌肽Kunyuenin及其制備和應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種昆崳林蛙抗菌肽Kunyuenin，昆崳林蛙抗菌肽Kunyuenin為環(huán)狀多肽，分子量1584.97Da，等電點(diǎn)8.96。

所述昆崳林蛙抗菌肽Kunyuenin氨基酸序列為：

Phe¹?Leu²?Pro³?Phe⁴?Phe⁵?Ala⁶?Ala⁷?Cys⁸?Ala⁹?Ile¹⁰?Thr¹¹?Arg¹²?Lys¹³?Cys¹⁴。

所述編碼昆崳林蛙抗菌肽Kunyuenin前體的基因由279個(gè)核苷酸組成，自5’端至3’端序列為:

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昆崳林蛙抗菌肽Kunyuenin的制備方法，所述抗菌肽是以化學(xué)合成方法產(chǎn)生，氧化環(huán)化，其中兩個(gè)半胱氨酸殘基之間形成一對(duì)分子內(nèi)二硫鍵，C末端酰胺化。

昆崳林蛙抗菌肽Kunyuenin的應(yīng)用，所述昆崳林蛙抗菌肽Kunyuenin用于制備抗微生物藥物或化妝品添加劑的用途。