[發明專利]用于檢測11-去氫血栓烷素B2的ELISA試劑盒

無效

• 申請號: 201210287286.7
• 申請日: 2012-08-13
• 公開（公告）號: CN103592430A
• 公開（公告）日: 2014-02-19
• 發明（設計）人: 董京飛;張濤;張建寧;周洲
• 申請（專利權）人: 張濤
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53
• 代理公司: 北京天昊聯合知識產權代理有限公司 11112
• 代理人: 丁業平;張天舒

技術領域

本發明涉及一種ELISA檢測試劑盒，具體而言，涉及一種用于檢測11-去氫血栓烷素B2的ELISA試劑盒。

背景技術

心腦血管疾病在全球范圍內已形成流行趨勢，極大地威脅公眾健康，并帶來嚴重的社會負擔。近年來，我國心腦血管疾病發病率上升迅速，心腦血管疾病一直位于我國疾病譜的前三位。據估計每年由此造成的醫療費用數百億，并且一直呈快速增長的趨勢。因此，積極控制危險因素，特別是選用安全、有效、經濟的藥物，是減少死亡、降低醫療費用的關鍵。其中，簡單有效的預防治療方法包括應用阿司匹林，其可以控制50％的臨床致殘或致死率。

阿司匹林(乙酰水楊酸)已應用百年，大量的研究奠定了阿司匹林在心腦血管疾病防治中的基石地位，成為醫藥史上三大經典藥物之一，被譽為“世界第八大奇跡”。美國最權威的約翰霍普金斯醫學院(John?Hopkins?University)預防心肌梗死和腦卒中指南中都把阿司匹林治療放在首要位置。新近的抗栓試驗協作組(ATC)匯總分析顯示，阿司匹林使心肌梗死、腦卒中等高危患者的血栓性血管事件減少四分之一，血栓性血管性疾病死亡減少六分之一。回顧性調查研究也顯示，阿司匹林預防心肌梗死和腦卒中的血栓性血管事件有效率是他酊類降酯藥的兩倍。

阿司匹林的抗栓效果顯而易見，然而仍有部分服用阿司匹林的患者會出現血栓性血管事件。針對這種現象，一些學者提出了阿司匹林“抵抗”(Aspirin?Resistance)的概念。根據多次美國大規模臨床調查，在服用阿司匹林的患者當中，有大約25％的患者極少或沒有達到治療效果。進一步的研究結果表明，有阿司匹林抵抗的患者發生心肌梗死和腦卒中的幾率是阿司匹林敏感患者的2-3倍。近年來，針對亞洲人群的大規模臨床調查研究同樣證實了阿司匹林抵抗現象的廣泛存在。造成阿司匹林抵抗的原因有很多，包括個體基因差異、環境因素、服用劑量以及病人是否遵醫囑等。

當前醫學發展進入了個體化醫療時代，阿司匹林的治療應用就是典型代表。對于阿司匹林治療效果的檢測，不僅可用于證實阿司匹林抵抗患者的存在，同時能量化患者對于阿司匹林的反應，以此調節阿司匹林的治療劑量，達到個體化治療的目的。該檢測方法通過測量阿司匹林治療效果，還可預測心血管事件發生的幾率。因此，測量和監測阿司匹林的治療效果對于正常及患病人群，尤其是心腦血管患者來說極其重要。

目前通常采用的是11-去氫血栓烷素B2(11-dehydro-thromboxane?B2)作為分析阿司匹林的療效的指標，其原因如下：處于活化狀態的血小板會分泌強效的使血管收縮以及血小板聚集的血栓烷素A2(Thromboxane?A2)。血栓烷素A2是由花生四烯酸(Arachidonic?acid)通過環氧酶-1(Cyclooxygenase-1，COX-1)、血栓素合成酶(Thromboxane?synthase)轉化而來的。血栓烷素A2在血漿中半衰期短，因此會被快速水解成血栓烷素B2。之后血栓烷素B2通過11-脫氫酶(11-dehydrogenase)被轉化成11-去氫血栓烷素B2。而11-去氫血栓烷素B2在血漿中很難被降解，并且通過腎臟排泄。因此，11-去氫血栓烷素B2可以作為體內血栓烷素生成以及血小板活化的指標。而在不具有阿司匹林抵抗的患者中，阿司匹林可通過將環氧酶-1不可逆地酰化，而抑制血栓烷素的合成。因此，測量體內血栓烷素代謝產物，比如11-去氫血栓烷素B2，可以用于判斷體內血栓烷素的生成以及分析阿司匹林的療效。

目前現有技術中已出現了用于檢測不同個體的接受阿司匹林治療的反應差異的診斷試劑盒，例如，Cayman公司等生產的檢測試劑盒(Aspirin?Effect?Detection?Kit)。該類試劑盒所采用的檢測原理是：采用競爭性酶聯免疫技術檢測尿液樣品(正常人群尿液中11-去氫血栓烷素B2的濃度在0.4-4ng/ml)中11-去氫血栓烷素B2，從而確認不同個體的接受阿司匹林治療的反應差異，其中其采用的競爭性酶聯免疫技術的原理參見圖1B。該技術所存在的缺陷是：其檢測的分光光度值讀數偏低，讀數之間差異較大，因此容易導致結果的錯誤率偏高，結果間差異最大可達到27％。

發明內容

為解決上述現有技術中存在的問題，本發明提供了一種用于檢測11-去氫血栓烷素B2的ELISA(enzyme-linked?immunosorbent?assay，酶聯免疫吸附試驗)試劑盒。

具體而言，本發明提供：

(1)一種用于檢測11-去氫血栓烷素B2的ELISA試劑盒，所述的ELISA試劑盒采用的是雙抗體夾心法，其中，