[發(fā)明專利]一種離子液體-石墨烯納米復(fù)合物、其制備方法及電化學(xué)免疫檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210287253.2
• 申請日: 2012-08-13
• 公開（公告）號(hào): CN102778571A
• 公開（公告）日: 2012-11-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 仲召陽;王東;關(guān)偉;梁偉;戴楠;卿毅
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第三附屬醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/531;G01N27/48
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵;馮瓊

1.一種離子液體-石墨烯納米復(fù)合物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1：取石墨烯用第一陽離子表面活性劑的水溶液分散、超聲處理后制得第一陽離子表面活性劑-石墨烯復(fù)合物；

步驟2：取所述第一陽離子表面活性劑-石墨烯復(fù)合物與第二陽離子表面活性劑的水溶液混合制得石墨烯納米片；

步驟3：取所述石墨烯納米片經(jīng)超聲分散后與離子液體混合，即得；

所述第一陽離子表面活性劑選自十六烷基三甲基溴化銨、十二烷基三甲基氯化銨、十二烷基三甲基溴化銨、十六烷基三甲基氯化銨或季胺鹽型gemini表面活性劑C₁₂C₆C₁₂Br₂；

所述第二陽離子表面活性劑選自聚對苯乙烯磺酸鈉、聚丙烯酸鈉或?qū)谆揭蚁┗撬徕c。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟3中所述離子液體為1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法制得的離子液體-石墨烯納米復(fù)合物在電化學(xué)免疫檢測中的應(yīng)用。

4.一種電化學(xué)免疫檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1：獲得二茂鐵標(biāo)記的待測蛋白抗體；

步驟2：取石墨烯用第一陽離子表面活性劑的水溶液分散、超聲處理后制得第一陽離子表面活性劑-石墨烯復(fù)合物，再與第二陽離子表面活性劑的水溶液混合制得石墨烯納米片，經(jīng)超聲分散后與離子液體經(jīng)第一混合，制得離子液體-石墨烯納米復(fù)合物；

步驟3：取所述二茂鐵標(biāo)記的待測蛋白抗體與所述離子液體-石墨烯納米復(fù)合物經(jīng)第二混合后，再加入堿性磷酸酯酶經(jīng)第三混合，制得離子液體-石墨烯納米復(fù)合物-堿性磷酸酯酶及二茂鐵標(biāo)記的待測蛋白抗體共耦合物；

步驟4：將玻碳電極表面修飾處理后置于待測蛋白抗體溶液中充分結(jié)合，封閉以去掉非特異性結(jié)合位點(diǎn)，，制得免疫電極；

步驟5：取所述免疫電極與不同濃度梯度的待測蛋白標(biāo)準(zhǔn)品溶液混合后，與所述離子液體-石墨烯納米復(fù)合物-堿性磷酸酯酶及二茂鐵標(biāo)記的待測蛋白抗體共耦合物混合后制得工作電極；

步驟6：在緩沖溶液中，在底物抗壞血酸磷酸酯鹽存在的條件下，取所述工作電極、免疫電極分別與待測蛋白溫育，以鉑絲電極作為對電極，飽和甘汞電極(SCE)作為參比電極，采用循環(huán)伏安法進(jìn)行電化學(xué)檢測，以工作電極和免疫電極的響應(yīng)電流之差和所述待測蛋白標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；

步驟7：取所述免疫電極與待測蛋白樣品溶液溫育，采用循環(huán)伏安法進(jìn)行電化學(xué)檢測，測得待測蛋白樣品溶液的電化學(xué)峰峰電流強(qiáng)度，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比對，獲得所述待測蛋白樣品溶液的濃度；

所述第一陽離子表面活性劑選自十六烷基三甲基溴化銨、十二烷基三甲基氯化銨、十二烷基三甲基溴化銨、十六烷基三甲基氯化銨或季胺鹽型gemini表面活性劑C₁₂C₆C₁₂Br₂；

所述第二陽離子表面活性劑選自聚對苯乙烯磺酸鈉、聚丙烯酸鈉或?qū)谆揭蚁┗撬徕c。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的電化學(xué)免疫檢測方法，其特征在于，步驟4中所述預(yù)處理為取所述玻碳電極拋光成鏡面，超聲處理晾干后，表面修飾所述離子液體-石墨烯納米復(fù)合物后吸附金納米鏈。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的電化學(xué)免疫檢測方法，其特征在于，步驟6中所述緩沖溶液為Tris-HCl緩沖溶液。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的電化學(xué)免疫檢測方法，其特征在于，步驟6中所述緩沖溶液為pH值為7～9的Tris-HCl緩沖溶液。

8.一種電化學(xué)免疫檢測脫嘌呤脫嘧啶核酸內(nèi)切酶/氧化還原因子的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1：獲得二茂鐵標(biāo)記的脫嘌呤脫嘧啶核酸內(nèi)切酶/氧化還原因子抗體；

步驟2：取石墨烯用第一陽離子表面活性劑的水溶液分散、超聲處理后制得第一陽離子表面活性劑-石墨烯復(fù)合物，再與第二陽離子表面活性劑的水溶液混合制得石墨烯納米片，經(jīng)超聲分散后與離子液體經(jīng)第一混合，制得離子液體-石墨烯納米復(fù)合物；

步驟3：取所述二茂鐵標(biāo)記的脫嘌呤脫嘧啶核酸內(nèi)切酶/氧化還原因子抗體與所述離子液體-石墨烯納米復(fù)合物經(jīng)第二混合后，再加入堿性磷酸酯酶經(jīng)第三混合，制得離子液體-石墨烯納米復(fù)合物-堿性磷酸酯酶及二茂鐵標(biāo)記的脫嘌呤脫嘧啶核酸內(nèi)切酶/氧化還原因子抗體共耦合物；

步驟4：將玻碳電極表面修飾處理后置于脫嘌呤脫嘧啶核酸內(nèi)切酶/氧化還原因子抗體溶液中充分結(jié)合，封閉以去掉非特異性結(jié)合位點(diǎn)，，制得免疫電極；

步驟5：取所述免疫電極與不同濃度梯度的脫嘌呤脫嘧啶核酸內(nèi)切酶/氧化還原因子標(biāo)準(zhǔn)品溶液混合后，與所述離子液體-石墨烯納米復(fù)合物-堿性磷酸酯酶及二茂鐵標(biāo)記的脫嘌呤脫嘧啶核酸內(nèi)切酶/氧化還原因子抗體共耦合物混合后制得工作電極；

步驟6：在緩沖溶液中，在底物抗壞血酸磷酸酯鹽存在的條件下，取所述工作電極、免疫電極分別與脫嘌呤脫嘧啶核酸內(nèi)切酶/氧化還原因子溫育，以鉑絲電極作為對電極，飽和甘汞電極(SCE)作為參比電極，采用循環(huán)伏安法進(jìn)行電化學(xué)檢測，以工作電極和免疫電極的響應(yīng)電流之差和所述脫嘌呤脫嘧啶核酸內(nèi)切酶/氧化還原因子標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；

步驟7：取所述免疫電極與脫嘌呤脫嘧啶核酸內(nèi)切酶/氧化還原因子樣品溶液溫育，采用循環(huán)伏安法進(jìn)行電化學(xué)檢測，測得脫嘌呤脫嘧啶核酸內(nèi)切酶/氧化還原因子樣品溶液的電化學(xué)峰峰電流強(qiáng)度，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比對，獲得所述脫嘌呤脫嘧啶核酸內(nèi)切酶/氧化還原因子樣品溶液的濃度；

所述第一陽離子表面活性劑選自十六烷基三甲基溴化銨、十二烷基三甲基氯化銨、十二烷基三甲基溴化銨、十六烷基三甲基氯化銨或季胺鹽型gemini表面活性劑C₁₂C₆C₁₂Br₂；

所述第二陽離子表面活性劑選自聚對苯乙烯磺酸鈉、聚丙烯酸鈉或?qū)谆揭蚁┗撬徕c。