[發(fā)明專利]加強(qiáng)促進(jìn)有機(jī)肥堆肥發(fā)酵菌劑的制備方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210286818.5
• 申請(qǐng)日: 2012-08-14
• 公開（公告）號(hào): CN102796668A
• 公開（公告）日: 2012-11-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張清敏;劉志軍;李明;張彥峰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 葉城縣金秋實(shí)業(yè)生物肥有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/00
• 分類號(hào): C12N1/00;C12N1/16;C12N1/18;C12N1/20;C05F17/00;C05F9/04;C12R1/10;C12R1/125;C12R1/01;C12R1/865;C12R1/74
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技術(shù)領(lǐng)域

生物技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明涉及一種加強(qiáng)促進(jìn)有機(jī)肥堆肥發(fā)酵過程的菌劑的制備方法。

背景技術(shù)

在有機(jī)肥大量需要的今天，將雞糞、污泥和生活垃圾經(jīng)過堆肥化，轉(zhuǎn)化成腐熟的有機(jī)肥是發(fā)展趨勢。但是，在自然堆肥化過程中往往需要幾個(gè)月甚至幾年，不僅不能完全腐熟而且不斷散發(fā)出惡臭，污染周邊的環(huán)境，殘存有害病菌、蟲卵，直接施用，會(huì)造成土傳病害、蟲害。為了改變這種現(xiàn)狀，利用能降解含氨(胺)的菌群，把產(chǎn)生惡臭的物質(zhì)降解除去，同時(shí)在堆肥化過程的各階段(室溫-中溫-高溫)，細(xì)菌與真菌配合促進(jìn)好氧發(fā)酵過程，即腐熟化的完成。在堆肥化過程完成后有效活菌數(shù)仍然有1×10⁸cfu/g。采用細(xì)菌-真菌配合加強(qiáng)促進(jìn)雞糞、污泥和垃圾堆肥化的菌劑及其高密度、高活性的生產(chǎn)工藝還未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：提供一種高密度、高活性的加強(qiáng)促進(jìn)堆肥化過程的菌劑的制備方法。

本發(fā)明解決該技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：

利用枯草芽孢桿菌CGMCC1.775(Bacillus?subtilis)、地衣芽孢桿菌CGMCC1.91(Bacilluslicheniformis)、沼澤紅假單胞菌CGMCC?1.2181(Rhodopseudomonas?palustris)、釀酒酵母CGMCC2.1(Saccharomyces?cerevisiae)和熱帶假絲酵母CGMCC2.563(Candida?tropicalis)，都是能產(chǎn)生氧化物酶、脫氫酶等和脂多糖類表面活性劑的菌，能夠在接近堆肥物料顆粒的同時(shí)逐步降解含氨(胺)組分，從而達(dá)到除臭、促進(jìn)堆肥化的目的；因?yàn)檫@五種菌都源于土壤，所以在進(jìn)入物料后能很快形成優(yōu)勢菌群，占據(jù)一定生態(tài)位。將五種菌經(jīng)優(yōu)化組合組成復(fù)合菌群，經(jīng)活化和三級(jí)液體擴(kuò)大培養(yǎng)并吸附、固定化于草炭上制備成固體菌劑。其中各組分的質(zhì)量配比基本上是1∶1∶1∶1∶1.這五種菌都是農(nóng)業(yè)部允許使用的安全、無害的菌。五株菌種均購于中國普通微生物菌種保藏管理中心(CGMCC)。

加強(qiáng)促進(jìn)堆肥化的菌制劑的制備方法包括下述步驟：

1.將冰箱2-4℃保存的各斜面菌種活化，分別試管-搖瓶培養(yǎng)；枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌和沼澤紅假單胞菌用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基培養(yǎng)(配方：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化鈉5g，蒸餾水1000mL，pH值7.2-7.4)。釀酒酵母和熱帶假絲酵母用馬鈴薯-蔗糖培養(yǎng)基培養(yǎng)(配方：去皮、去殘馬鈴薯200g，切絲或切片，用約1000mL自來水，80-100℃煮30min，雙層紗布過濾，得到1000mL濾液(不足部分用自來水補(bǔ)充)，加入蔗糖20g，自然pH值)。培養(yǎng)基滅菌：0.1Mpa，121℃，滅菌30min；接種后，150-200r/min振搖，28～30℃培養(yǎng)24-48h；

2.將上述搖瓶培養(yǎng)的各種子菌液混合，二級(jí)液體擴(kuò)大培養(yǎng)(30L發(fā)酵罐)，以玉米面-豆粕培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)(配方：玉米面30g，豆粕20g，硝酸鉀10g，硫酸鎂0.5g，磷酸氫二鉀0.5g，氯化鈉0.5g，硫酸亞鐵0.001g，自來水1000mL，用氫氧化鈣調(diào)節(jié)pH值7.4-7.8)。培養(yǎng)基滅菌：0.1Mpa，121℃，滅菌30min；接種量按質(zhì)量百分比5％～10％，300r/min攪拌，6-8L/min通氣量，28～30℃培養(yǎng)20～24h；用顯微計(jì)數(shù)法(稀釋100倍，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù))和分光光度法測定發(fā)酵液的吸光值(稀釋100倍，在660nm波長下，測定吸光值)，以檢測菌群生長情況。達(dá)到吸光值最大或菌群數(shù)最多，停止培養(yǎng)，轉(zhuǎn)入下一級(jí)培養(yǎng)。

3.培養(yǎng)基同上，再經(jīng)三級(jí)液體擴(kuò)大培養(yǎng)(300L發(fā)酵罐)，接種量按質(zhì)量百分比5％～10％，200r/min攪拌，10-15L/min通氣量，28～30℃培養(yǎng)20～24h；用顯微計(jì)數(shù)法和分光光度法測定發(fā)酵液的吸光值和菌群數(shù)，以檢測菌群生長情況。達(dá)到吸光值最大，菌液達(dá)到1-5×10¹⁰cfu/mL，停止培養(yǎng)。

4.以草炭粉末為載體將混合菌群均勻吸附、固定化于4～5倍草炭上，做成固體菌劑。

5.菌劑密封于內(nèi)襯聚乙烯的包裝袋內(nèi)，室溫保存，避暴曬、避高溫、高濕。

6.保質(zhì)期1年。

本發(fā)明的有益效果