[發明專利]一種豬圓環病毒2型重組亞單位疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201210286278.0
• 申請日: 2012-08-13
• 公開（公告）號: CN102813918A
• 公開（公告）日: 2012-12-12
• 發明（設計）人: 吳紅云;鄭鳴;徐進;李厚偉
• 申請（專利權）人: 鄭州后羿制藥有限公司
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61P31/20;C12N15/62;C07K19/00;C12R1/93
• 代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

1.一種豬圓環病毒的2型重組亞單位疫苗，其特征在于：所述的亞單位疫苗主要由豬圓環病毒2型融合蛋白rYSORF和佛氏佐劑組成。

2.根據權利要求1所述的豬圓環病毒的2型重組亞單位疫苗，其特征在于：所述的融合蛋白rYSORF中加入的佛氏佐劑是佛氏不完全佐劑，先將純化后的融合蛋白調至1mg/ml，按佛氏不完全佐劑與融合蛋白的體積比為1:1在攪拌狀態下加入。

3.一種豬圓環病毒2型重組亞單位疫苗的制備方法，其特征在于：包括下述步驟：

1）構建人工基因YSORF:

選取豬圓環病毒2型ORF1和ORF2蛋白免疫優勢區，利用生物信息學優化密碼子，形成人工基因序列，命名為YSORF；設計引物，利用重疊PCR(SOE)技術拼接YSORF，該序列包含柔性肽(G₃S)₅，連接ORF1和ORF2蛋白免疫優勢區；然后利用生物信息學軟件Vector?NTI對該序列進行密碼子優化，獲得人工基因YSORF序列；

2）構建重組表達載體rYSORF；

3）融合蛋白rYSORF的誘導表達；

在TB液體培養基中誘導表達，優化表達條件促進融合蛋白在上清中表達；

4）分離純化大腸桿菌表達的豬圓環病毒2型重組蛋白；

5）利用純化的豬圓環病毒2型融合蛋白，輔以佛氏不完全佐劑，制備成豬圓環病毒2型重組亞單位疫苗。

4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于：所述步驟3）中融合蛋白rYSORF表達條件的優化是將含有人工基因YSORF的工程菌按1/500接種液體TB培養基，37℃劇烈振蕩培養至OD600≈1.0時，加入誘導劑IPTG至0.05mM和表面活性劑SDS至0.05%，40℃誘導培養6小時，獲得可溶性融合蛋白rYSORF。

5.一種構建人工基因YSORF，其特征在于：所述基因YSORF序列包含序列表中SEQ?IDNO.1、SEQ?IDNO.2和SEQ?IDNO.3，且分別位于人工基因YSORF序列的上游、中部和下游。

6.一種融合蛋白rYSORF，其特征在于：所述融合蛋白rYSORF序列包含序列表中的SEQ?IDNO.4、SEQ?IDNO.5和SEQ?IDNO.6，且位于融合蛋白rYSORF序列氨基端、中部和羧基端。