[發明專利]羧甲基精氨酸的免疫測定方法

無效

• 申請號: 201210284489.0
• 申請日: 2012-08-08
• 公開（公告）號: CN102928604A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發明（設計）人: 富樫智子;八木雅之
• 申請（專利權）人: 愛科來株式會社
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/53
• 代理公司: 北京東方億思知識產權代理有限責任公司 11258
• 代理人: 肖善強

技術領域

本發明涉及羧甲基精氨酸的免疫測定方法。

背景技術

AGEs(晚期糖化終末產物，Advanced?Glycation?end-products)是美拉德反應的后期反應中生成的物質，其與老化、多種疾病的發病/進展的相關聯性正日益清楚。例如，已知：皮膚中AGEs生成、積蓄后，成為皮膚彈性降低、皺紋、松弛及色斑等的原因之一。

N^ω-羧甲基精氨酸(下文中也稱為“CMA”)作為AGEs中的一種被人所知。已確認CMA是膠原中特異性生成的AGEs(例如，日本特許3889190號)。因此，提出了下述CMA生成抑制劑，所述抑制劑的目的是通過抑制生物體中CMA的生成來防止由CMA的生成和向膠原的積蓄而導致的老化/疾病(WO2011/004734)。此外，因為糖尿病患者的血清蛋白質中的CMA水平較之同年齡段的健康人的血清蛋白質的CMA水平顯著更高，所以期待CMA作為糖尿病中糖化的新診斷標志物的可能性(Odani?et?al.，Biochemical?and?Biophysical?Research?Communications?285，1232-1236(2001))。此外，還期待CMA作為骨質疏松癥的標志物的利用可能性。

從CMA被發現以前開始，戊糖素(pentosidine)、羧甲基賴氨酸(下文中稱為“CML”)、吡咯素(pyrraline)等的數百種的物質被鑒定為AGEs，并嘗試將它們作為抗糖化標志物利用。但是，因為戊糖素、CML并非組織特異性的，因此即使測定它們的血中濃度，也無法確定發生糖化的組織。另一方面，如上文所述，因為CMA對膠原等結締組織蛋白質來說是特異性的，因此測定CMA得到的值可作為結締組織蛋白質(特別是膠原)中糖化的指標。因此，提出了特異性識別CMA的抗體及含有所述抗體的用于檢測CMA的免疫試劑。

發明內容

本發明涉及對試樣中羧甲基精氨酸的測定方法，所述方法包括：用含有尿素的預處理劑處理試樣，以及根據免疫學方法測定前述經處理的試樣中的羧甲基精氨酸。

附圖說明

圖1是示出實施例1的結果的一個例子的圖；

圖2是示出比較例1的結果的一個例子的圖；

圖3是示出從實施例1和比較例1的結果得到的校正線的一個例子的圖。

具體實施方式

使用日本特開2002-243732號公報中公開的抗體等測定試劑，針對含有CMA標準品的樣品，通過免疫學方法，進行CMA測定，獲得了很好的靈敏度。但是，本發明的發明人們發現了新的問題——在生物體試樣(特別是來自血液的試樣)的情況下，即使使用上述測定試劑，CMA也基本不被檢出。另一方面，作為測定生物體試樣中的CMA的其它方法，例如有LC/MS法等，但是該方法中存在下述問題：該方法需要特殊的裝置，測定極其復雜。因此，本發明提供了新的CMA測定方法，所述方法能簡便地、以良好精度測定CMA。

在一種或多種實施方式中，本發明涉及下述試樣中的羧甲基精氨酸的測定方法(下文中也稱為“本發明的測定方法”)，所述方法包括：用含有尿素的預處理劑處理試樣，以及通過免疫學方法，對前述經處理的試樣中的羧甲基精氨酸加以測定。

通過本發明，例如，能夠簡單且以良好精度測定如生物體試樣等的試樣中的CMA。

本發明基于下述發現：通過尿素(CO(NH₂)₂)對生物體試樣進行預處理之后，通過免疫學方法測定CMA，能夠簡單且以良好精度測定生物體試樣中的CMA。

通過用尿素對生物體試樣進行預處理、能用免疫學方法測定生物體試樣中的CMA的詳細機制尚不清楚，但推定為如下。即，認為生物體試樣(特別是血液試樣)中的CMA是以與清蛋白等蛋白質結合的狀態存在的。因此，認為即使添加特異性識別CMA的抗體，因為CMA基本不能與抗體結合所以基本不被檢出，而通過用尿素進行預處理，由于與CMA結合的蛋白質發生了結構變化，或者不再保持CMA與蛋白質的結合等原因，CMA和抗體的反應性提高。但是，本發明不限于通過這些機制進行解釋。