[發(fā)明專利]一種發(fā)酵產低溫脂肪酶的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210278064.9
• 申請日: 2012-08-07
• 公開（公告）號: CN103571808A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發(fā)明（設計）人: 李洪兵;張峰;張明
• 申請（專利權）人: 湖南鴻鷹生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/20
• 分類號: C12N9/20
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種發(fā)酵產低溫脂肪酶的方法，是以自己篩選的野生菌株為出發(fā)菌種，采用改進的種子培養(yǎng)基和產酶培養(yǎng)基及方法發(fā)酵制備低溫脂肪酶，工藝為：

(1)種子培養(yǎng)

種子培養(yǎng)基：蛋白胨10g/L，氯化鈉10g/L，酵母浸出汁5g/L，pH?7.0；

取250ml的三角瓶若干個，每個裝種子培養(yǎng)基50ml，121℃滅菌30分鐘，冷卻；

在每個裝種子培養(yǎng)基50ml的三角瓶中挑取一環(huán)菌接入，置于搖床培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：溫度30℃，轉速200r/min，培養(yǎng)8小時即為發(fā)酵種子液；

(2)產酶培養(yǎng)

產酶培養(yǎng)基：牛肉膏40g/L，橄欖油10ml/L，Triton?X-1005ml/L，初始PH＝7.0，泡敵3ml/L；

取產酶培養(yǎng)基4.5升加入到7升發(fā)酵罐中，121℃滅菌40分鐘，冷卻；

按10％的接種量，將450ml發(fā)酵種子液加入到含產酶培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，設定發(fā)酵參數，，溫度30℃，pH?7.0，轉速350r/min，通氣量1.5，L/min/L，發(fā)酵35小時；

(3)脂肪酶液制備

將發(fā)酵液用高速冷凍離心機在4℃10,800g離心15min的條件下離心，上清液即為脂肪酶粗酶液；

(4)酶活力的測定

以對硝基苯丁酸酯p-NPB為底物，將pH?9.0的3.7mL?0.1mol/L?Tris-HCl緩沖液和0.2mL?10mmol/L?p-NPB組成的反應體系，30℃保溫15min后加入0.1mL酶液，在405nm下測吸光值，以1min內催化產生1μmol的對硝基酚，系數ε＝1.86×10⁴cm^-1×M^-1，所需的酶量為1個酶活力單位。