[發明專利]一種砂梨多倍體的誘導方法

無效

• 申請號: 201210277967.5
• 申請日: 2012-08-07
• 公開（公告）號: CN102763595A
• 公開（公告）日: 2012-11-07
• 發明（設計）人: 張紹鈴;薛亞男;吳俊;陶書田;齊開杰
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;傅婷婷

1.一種砂梨多倍體的誘導方法，其特征在于通過如下步驟實現：

（1）在超凈工作臺上，將砂梨無菌試管苗剪去頂端，促進腋芽萌發，4-6d后將試管苗剪成帶葉的單芽莖段；

（2）在遮光的情況下，將單芽莖段浸漬在經高壓滅菌的0.05%～0.2%秋水仙素溶液中，然后在搖床上以120～140r/min震蕩，處理40～50h，處理完畢后無菌水沖洗3次；

（3）將浸漬處理后的單芽莖段轉接到含有0.002%～0.003%秋水仙素的增殖培養基中，單芽莖段的腋芽要埋入增殖培養基中，使生長點與藥液充分接觸，葉片露出培養基，暗培養6-10d后轉到光下培養，待處理的腋芽萌動抽莖長至1～2cm后繼代到新鮮的培養基中；

所述的增殖培養基：1/2MS+6-BA?2.00～1.50mg/L+IBA?0.2～0.4mg/L+GA₃?1.0～3.0mg/L+蔗糖25～35g/L+瓊脂5～7g/L，PH5.8；

培養條件：培養室溫度25±1℃，光周期：15～20h光照/6～10h黑暗，相對濕度40％～80％；

（4）在新鮮培養基上繼代培養3～4次后，從中選擇形態變異明顯的植株進行鑒定，然后對鑒定為多倍體的植株進行擴繁；

繼代培養基：1/2MS+6-BA?2.00～1.50mg/L+IBA?0.2～0.4mg/L+GA₃?1.0～3.0mg/L+蔗糖25～35g/L+瓊脂5～7g/L，PH5.8；

培養條件：培養室溫度25±1℃，光周期為15～20h?h光照/6～10h黑暗，相對濕度40％～80％。

2.根據權利要求1所述的砂梨多倍體的誘導方法，其特征在于通過如下步驟實現：

（1）在超凈工作臺上，將砂梨無菌試管苗剪去頂端，促進腋芽萌發，4-6d后將試管苗剪成帶葉的單芽莖段；

（2）在遮光的情況下，將單芽莖段浸漬在經高壓滅菌的0.1%～0.2%秋水仙素溶液中，然后在搖床上以130～140r/min震蕩，處理45～50h，處理完畢后無菌水沖洗3次；

（3）將浸漬處理后的單芽莖段轉接到含有0.002%～0.003%秋水仙素的增殖培養基中，單芽莖段的腋芽要埋入增殖培養基中，使生長點與藥液充分接觸，葉片露出培養基，暗培養8d后轉到光下培養，待處理的腋芽萌動抽莖長至1～2cm后繼代到新鮮的培養基中；

所述的增殖培養基：1/2MS+6-BA?1.50mg/L+IBA?0.3mg/L+GA₃?2.0mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L，PH5.8；

培養條件：培養室溫度25±1℃，光周期：16h光照/8h黑暗，相對濕度40％～80％；

（4）在新鮮培養基上繼代培養3～4次后，從中選擇形態變異明顯的植株進行鑒定，然后對鑒定為多倍體的植株進行擴繁；

繼代培養基：1/2MS+6-BA?1.50mg/L+IBA?0.3mg/L+GA₃?2.0mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L，PH5.8；

培養條件：培養室溫度25±1℃，光周期為16h光照/8h黑暗，相對濕度40％～80％。

3.根據權利要求2所述的砂梨多倍體的誘導方法，其特征在于所述的砂梨為‘翠冠’。