[發明專利]殼聚糖改性的肝素鋰抗凝添加劑的制備方法

有效

• 申請號: 201210276551.1
• 申請日: 2012-08-03
• 公開（公告）號: CN102805883A
• 公開（公告）日: 2012-12-05
• 發明（設計）人: 王利偉;鐘德優;沈玉建
• 申請（專利權）人: 福州長庚醫療器械有限公司
• 主分類號: A61L33/10
• 分類號: A61L33/10;A61L33/08
• 代理公司: 福州市鼓樓區京華專利事務所(普通合伙) 35212
• 代理人: 宋連梅

【技術領域】

本發明涉及一種殼聚糖改性的肝素鋰抗凝添加劑的制備方法，以提高肝素鋰與血液的相容性，并使溶解時間明顯縮短。

【背景技術】

抗凝是用物理或化學方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性，以阻止血液凝固。能夠阻止血液凝固的物質，稱為抗凝劑或抗凝物質。常用抗凝劑有EDTA、草酸鹽、枸櫞酸鹽和肝素鹽。肝素可以加強抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）滅活絲氨酸蛋白酶作用，阻止凝血酶的形成，并阻止血小板聚集等作用，從而阻止血液凝固。肝素是紅細胞透滲脆性試驗的理想抗凝劑。目前采血管中作為抗凝劑添加的肝素鹽常選用肝素鋰鹽，相比鈉鹽，鋰的含量(3.5%～4.5%)比鈉(9.5%～12.5%)少,減少了血中微纖維形成的可能，同時肝素鋰鹽的使用不影響其它生理學上的檢測。但是肝素鋰為干燥晶體，它與血液混合不好，同時由于大量肝素的使用，其在血液中的溶解較慢，血液為膠性液體，肝素鋰的溶解性更慢，這就要求我們為獲得一支抗凝效果好的采血管必須改善肝素鋰的血溶解性。另外，肝素對已形成的血塊無抗凝效果，所以肝素必須在血液凝固之前迅速溶解分布于血液中才能發揮抗凝作用。肝素是一種酸性粘多糖，其結構為由糖醛酸及右旋基葡萄糖交替連結而成；肝素分子結構中每個糖單元含有羥基、硫酸基、硫酸氨基等七個酸性基團，具有較強的酸性，為線性陰離子聚電解質。

層層靜電自組裝是一種新穎的高分子間連接技術,它利用不同種類高分子間的靜電引力或氫鍵作用等特殊的作用力,形成兩種或多種聚合物單分子層的層層疊加,所得的薄膜厚度極小(一般在幾十個納米)并兼具有各組分原本的一定功能性。目前利用層層靜電自組裝技術制備抗凝血生物材料的方法已有報道，但還沒有出現一種利用該技術來制備用于采血管中的抗凝添加劑的方法。

如2003-10-15公開的，公開號為CN1448189A的中國發明揭示了一種采用靜電自組裝制備抗凝血生物材料的方法，它的步驟如下:1)采用表面改性方法在生物材料表面獲得具有正電荷或負電荷的荷電表面;2)將由1)制備的荷電材料浸入濃度為0.01mg/ml-10g/ml的荷相反電荷的聚電解質水溶液中,吸附平衡5-60分鐘,用蒸餾水洗滌,空氣吹干;將干燥后的材料浸入濃度為0.01mg/ml-10g/ml的荷相反電荷的聚電解質水溶液中,吸附平衡5-60分鐘,用蒸餾水洗滌,空氣吹干;交替重復以上步驟獲得含正負電荷聚電解質交替組裝的多層涂層表面,涂層聚電解質包含一種或一種以上的帶電抗凝血藥物。該涂層聚合物是在水溶性條件涂層的,可實現對具有復雜體型結構的生物醫用裝置的涂層修飾,形成穩定的醫用聚合物涂層,有效改善材料的抗凝血性。其中，所說的聚電解質為聚陰離子，包括白蛋白、肝素、磺化葡聚糖、尿激酶、透明質酸，聚苯乙烯磺酸鈉、海藻酸鈉的一種或多種混合物。所說的帶電抗凝血藥物，包括白蛋白、肝素、磺化葡聚糖、尿激酶、聚苯乙烯磺酸鈉。

再如2005年10月的高等學校化學學報第26卷發表的“層層靜電自組裝構建殼聚糖/肝素抗菌多層膜的研究”也揭示了一種利用層層靜電自組裝技術制備抗菌多層膜的方法，其是以具有抗菌作用的殼聚糖作為聚陽離子、具有抗凝血性的肝素作為聚陰離子，采用層層靜電自組裝的方法構建具有抗凝血和抗感染協同作用的功能多層膜。其具體方法是：

1、準備試劑：PET片(厚度50μm,半透明);肝素(高分子量,山東福瑞達生物化工有限公司);殼聚糖(重均分子量41×104,青島海匯有限公司);羅丹明標記殼聚糖是于4℃將2mg/mL羅丹明B異硫氰酸酯加入到015%(質量體積分數)的殼聚糖溶液中48h后得到的；

2、聚酯片的氨基化：先將聚酯片在索氏抽提器中用丙酮抽提7d,于30℃真空干燥24h至恒重,然后將處理過的聚酯片浸于37℃的0106g/mL己二胺(經精餾)異丙醇溶液中4h,使聚酯片表面共價結合上氨基,最后用三次蒸餾水充分漂洗,用同樣的方法干燥.將聚酯片浸于1mol/L?HCl中酸化20min,使聚酯片表面帶一定量的正電荷；

3、層層靜電自組裝：將氨基化和酸化處理后的基材浸于1mg/mL的肝素溶液中(預先調節pH=318)15min,用pH=318的三次蒸餾水漂洗.再將聚酯片浸于1mg/mL殼聚糖溶液中(預先調節pH=318)15min,用pH=318的三次蒸餾水漂洗.重復上述過程若干次,最后將樣品于30℃真空干燥48h.在紫外光譜測試時用羅丹明染色殼聚糖代替殼聚糖進行相同的組裝。