[發(fā)明專(zhuān)利]一種高產(chǎn)苯乙醇的大腸桿菌工程菌株及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210276491.3
• 申請(qǐng)日: 2012-08-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102851253A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-01-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳堅(jiān);張傳志;堵國(guó)成;康振;關(guān)澤宇
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/21
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/21;C12N15/70;C12P7/22;C12R1/19;C12R1/84;C12R1/865
• 代理公司: 北京匯信合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11335
• 代理人: 王秀麗

1.一種高產(chǎn)苯乙醇的大腸桿菌工程菌株，其特征在于表達(dá)畢赤酵母（Pichia?pastorisGS115）苯丙酮酸脫羧酶以及釀酒酵母（Saccharomyces?cerevisiae）乙醇脫氫酶。

2.權(quán)利要求1所述的工程菌株，其特征在于所述表達(dá)為單獨(dú)表達(dá)或串聯(lián)表達(dá)。

3.權(quán)利要求1所述工程菌株的構(gòu)建方法，其特征在于以高產(chǎn)苯丙氨酸的大腸桿菌為出發(fā)菌株，利用表達(dá)載體pCL1920表達(dá)來(lái)源于畢赤酵母以及釀酒酵母中苯乙醇合成途徑的兩個(gè)酶KDC、ADH1，獲得高產(chǎn)苯乙醇的大腸桿菌工程菌株。

4.權(quán)利要求1所述工程菌株發(fā)酵法生產(chǎn)苯乙醇的方法，其特征在于工程菌株活化后，按10%(v/v)的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵溫度33°C，搖床轉(zhuǎn)速200r/min，當(dāng)菌體生長(zhǎng)至OD₆₁₀為1.5-2.0時(shí)，迅速轉(zhuǎn)至38°C搖床，繼續(xù)培養(yǎng)至48h。

5.權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：（g/L）：葡萄糖35，(NH₄)₂SO₄5，KH₂PO₄3，MgSO₄·7H₂O3，NaCl1，Na-Citrate1.5，CaCl₂·2H₂O?0.015，F(xiàn)eSO₄·7H₂O?0.1125，Thiamine-HCl0.075，L-Tyr0.4，蛋白胨4，酵母粉2，Kan0.04，微量元素營(yíng)養(yǎng)液(TES)1.5mL/L，pH6.8±0.1；12g/L?CaCO₃用于調(diào)節(jié)pH；裝液量為50mL/250mL；

TES(g/L)：Al₂(SO₄)₃·18H₂O2.0，CoSO₄·7H₂O0.75，CuSO₄·5H₂O2.5，H₃BO₃0.5，MnSO₄·7H₂O24，Na₂MoO₄·2H₂O3.0，NiSO₄·6H₂O2.5，ZnSO₄·7H₂O15。