[發明專利]利用微生物菌防治蘋果腐爛病的方法

無效

• 申請號: 201210275442.8
• 申請日: 2012-08-03
• 公開（公告）號: CN103563993A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發明（設計）人: 魏立穎;趙立偉;張凱
• 申請（專利權）人: 天津綠動植物營養技術開發有限公司
• 主分類號: A01N63/02
• 分類號: A01N63/02;A01P3/00;C12N1/20
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及防治蘋果腐爛病的方法，主要利用微生物菌防治蘋果腐爛病。

背景技術

蘋果腐爛病俗稱爛皮病，臭皮病，是我國北方蘋果樹重要病害。主要為害6年生以上的結果樹，造成樹勢衰弱、枝干枯死、死樹，甚至毀園。華北、東北、西北地區發生普遍。蘋果腐爛病菌是弱寄生菌，凡是能夠導致樹勢變弱的因素都能誘發蘋果腐爛病。此病1年有兩個擴展高峰期。即3～4月和8～9月，春季重于秋季。當樹勢健壯、營養條件好時，發病輕微。當樹勢衰弱，缺肥干旱，結果過多，凍害及紅蜘蛛大發生后，腐爛病大發生。

農藥對農業的發展起著非常重要的作用，但隨著社會的發展，伴隨化學農藥引起的安全及環境問題也日益凸現，許多國家和地區相繼禁止了一些高毒、高殘留化學農藥的生產和使用，而利用微生物防治植物病蟲害，避免了化學農藥對人畜的毒害也不易產生抗藥性，同時可解決或緩解由于大量使用化學農藥造成的環境污染，是農藥發展的主要方向之一。隨著環境保護、農業可持續發展的需要，生物防治已成為植物病害防治的重要手段。農用抗生素是由微生物發酵過程中產生的次生代謝產物，是在低濃度時可抑制或殺滅作物的病、蟲、草害及調節作物生長發育的一類微生物農藥。農用抗生素作為生物農藥，以其高效、低毒、無殘留等優點在農作物病蟲害防治中發揮著重要作用。放線菌是具有巨大實用價值的一類微生物。許多放線菌的次生代謝產物具有醫藥和植物保護方面的用途，因此從放線菌中尋找農用活性物質具有廣闊的前景。

放線菌是在土壤微生物總數量中占有很高比例的一個群體，并且具有產生各種各樣抗生素和胞外酶的能力，是防治植物病蟲害和促進植物生長的一類極具潛力的重要微生物資源，從微生物中分離的生物活性物質有60％以上為放線菌的次級代謝產物，創制新型微生物源農藥防治植物病蟲害具有很大的市場前景和應用價值，因而篩選具有高殺菌活性的放線菌資源對開發新型農藥具有重大實踐意義。

發明內容

本發明的目的在于一種利用微生物菌防治蘋果腐爛病的方法，安全、高效、無殘留、對環境無污染，為開發新型農藥提供依據。

本發明所用的微生物菌株是放線菌菌株718、714、744、697菌株的一種或幾種。本發明的目的通過下述技術方案實現：微生物次生代謝產物的制備方法，包括以下步驟：

(1)放線菌斜面培養

在無菌操作下，用接種環將放線菌718、714、744、697菌株的一種或幾種的孢子接種于高氏I號培養基斜面上，“Z”字法，在28℃下培養5～7d。

(2)放線菌的液體發酵培養

用無菌接種環挑取3～5環接種于裝有100mL發酵培養基的250mL三角瓶中，25～30℃，250～300r/min條件下振蕩培養3～6天，取出將其用濾紙濾出上清液，得到發酵液；

(3)發酵液的純化

將發酵液移入50mL體積的離心管中，3000～5000r/min的離心機離心10～15min，保留濾液，即為放線菌發酵液。

所述高氏I號培養基為可溶性淀粉20g，KNO₃?1g，K₂HPO₄?0.5g，MgSO₄·7H₂O?0.5g，NaCl?0.05g?FeSO₄·7H₂O?0.01g，瓊脂20g，pH＝7.4～7.6。

所述的液體發酵培養基為葡萄糖5.0～20g，蛋白胨1.5～5.0g，NaCl?0.5～5.0g，小米5.0～20g，CaCO₃?2.0～4.0g，水1000mL。

本發明防治蘋果腐爛病的方法：

將一種菌株的發酵液或幾種混合發酵液與PDA培養基以(1～3)∶(9～7)的比例混合制成平板在中央分別接入蘋果腐爛病菌株的菌餅直徑為5mm，并且以無菌水處理作為對照，培養3d。

本發明與現有技術相比，具有以下優點和效果：本發明發酵工藝和純化工藝簡單。本發明發酵液對蘋果腐爛病病原菌具有較好的抑制作用，可望制成生物農藥，具有較高的經濟和社會效益。

具體實施方案

實施例1

本發明微生物次生代謝產物的制備方法，包括以下步驟：

(1)放線菌斜面培養

在無菌操作下，用接種環將放線菌718、697菌株的孢子接種于高氏I號培養基斜面上，“Z”字法，在28℃下培養5d。

(2)放線菌的液體發酵培養