[發明專利]一種高富硒鈍頂螺旋藻的培養及其檢測方法

有效

• 申請號: 201210275399.5
• 申請日: 2012-08-03
• 公開（公告）號: CN102876579A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發明（設計）人: 黃蓓;王鑫焱;沈敬連;武子涵;劉亞華
• 申請（專利權）人: 安徽大學;亳州市貢藥飲片廠
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;G01N21/64;C12R1/89
• 代理公司: 安徽合肥華信知識產權代理有限公司 34112
• 代理人: 余成俊

技術領域

本發明涉及一種應用于保健食品、醫藥領域的高富硒鈍頂螺旋藻的培養及其方法。

背景技術

螺旋藻是至今為止發現的營養最豐富、最全面的綠色食品，尤其蛋白質含量較高，氨基酸平衡，還含有豐富的必需脂肪酸(如r一亞麻酸等)，其中藻藍蛋白是螺旋藻含量最高的生物活性物質之一，可達藻體質量的20％左右，具有良好的抗氧化、抗腫瘤等作用。

硒是人體必需的微量元素之一,?其生理功能主要表現為硒蛋白和硒酶的抗氧化作用。我國通過人群補硒成功防治了多種疾病,?如克山病、大骨節病、心血管病、肝病及腫瘤等。利用生物轉化途徑生產具有較高生物活性的有機硒可避免無機硒的毒性,?并可協同天然活性分子的功能。因此,?利用生物體富集有機硒的研究受到廣泛關注。而螺旋藻（Spirulina）易于大規模培養，作為硒生物有機化的載體前景將十分廣闊。

何曉燕報道當亞硒酸鈉濃度小于100mg/L時,?對藻體生長有一定的促進作用,?其生物量、藻藍蛋白和別藻藍蛋白含量有增加,?藻體硒含量及富硒系數有所增高。黃峙等也研究了加硒方式對藻體富硒的影響，在溫度33～35℃，光照強度4000lx,光照時間24h,分步加硒，而且當亞硒酸鈉為300mg/L時，得到總硒含量為0.46mg/g的螺旋藻體。同時研究表明不同種類的螺旋藻在不同的培養條件下具有不同的富硒能力。

而市場上有機硒的來源有限，目前已經開發比較成熟的是富硒量較高的富硒酵母，陳福生等研究表明富硒酵母中中總硒含量為1.895mg/g,但酵母本身營養價值較低，而螺旋藻本身極具營養價值且對無機硒的耐受能力較強，而富硒大米，富硒茶有報道含硒量為20-300μg/kg.同時市場上保健品如靈芝孢子分價格比較昂貴，因此迫切需要開發出低成本，高營養價值、高免疫力的高富硒的螺旋藻保健品。

鑒于以上研究，本發明探索了易于操作、成本低廉并且富硒量及有機硒含量較高的富硒螺旋藻培養及其檢測方法。

發明內容??

????本發明的目的是獲得高富硒的螺旋藻培養及其檢測方法，以便開發出營養價值高、免疫力強的高有機硒的螺旋藻保健品，進一步提高使用者的免疫力。

為了實現上述目的本發明采用如下技術方案：

一種高富硒鈍頂螺旋藻的培養方法，其特征在于在溫度20～25℃、pH?8～10、光照強度2000～2500?lx、每天24h光照中培養，采用Zarrouk培養液，放在三角培養瓶中培養，接種密度為OD_560?=?0.25～0.35，分次添加Na₂SeO₃至總硒量達270-300mg/L，待OD₅₆₀為1.2～1.5時收集藻體，冷凍干燥，制得高富硒鈍頂螺旋藻。

高富硒鈍頂螺旋藻的培養方法，包括以下步驟：將鈍頂螺旋藻放在250ml的三角培養瓶中，采用Zarrouk培養液，在溫度20～25℃、pH?8～10、最佳光照強度2000-2500lx、每天24h光照中培養，接種密度為OD_560?=?0.25～0.35，接種體積150ml,然后放在光照培養箱中，當OD₅₆₀為0.7～0.8時第一次加Na₂SeO_3?13.5mg-15mg,當藻液OD₅₆₀為0.8-0.9時第二次添加Na₂SeO_3?13.5mg-15mg，當藻液OD₅₆₀為0.9-1.0時第三次添加Na₂SeO₃13.5mg-15mg繼續培養，待OD₅₆₀為1.2-1.5時收集鈍頂螺旋藻，培養周期為11-13d，用蒸餾水洗2-3次鈍頂螺旋藻，冷凍干燥后制得高富硒鈍頂螺旋藻。

高富硒鈍頂螺旋藻的檢測方法，包括以下步驟：用原子熒光光譜法檢測總硒及有機硒的含量；

（1）總硒測定：

取0.5g富硒螺旋藻，加9-11ml消化液搖勻后，所述的消化液為濃硝酸：高次氯酸=4:1配置得到，放置過夜，置于電熱板上加熱至有機物分解或色澤加深，補加1～3ml消化液繼續消化，控制溫度低于200℃，如此反復至消化液澄清，有HClO₄白煙冒出，繼續加熱至溶液1～3ml，用60%濃HCL定容在25ml容量瓶中，然后加0.5%NaBH₄至反應終點，用AFS-3100型雙道原子熒光光度計測量總硒含量；

（2）無機硒的測定：