[發明專利]一種豬用亞洲I型口蹄疫病毒滅活疫苗佐劑及制備方法

有效

• 申請號: 201210274528.9
• 申請日: 2012-08-03
• 公開（公告）號: CN102764435A
• 公開（公告）日: 2012-11-07
• 發明（設計）人: 景志忠;陳國華;曾爽;房永祥;賈懷杰;何小兵;藺國珍;才學鵬
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/135;A61P31/14
• 代理公司: 蘭州振華專利代理有限責任公司 62102
• 代理人: 張晉

技術領域

本發明涉及一種疫苗用佐劑，特別是一種獸用疫苗的佐劑。確切講本發明涉及一種豬用亞洲I型口蹄疫病毒滅活疫苗的佐劑及制備方法，這種佐劑中有重組豬白介素2（Porcine?Interleukine-2，pIL-2）。?

背景技術

佐劑是一種先與抗原或與抗原混合后同時注入到人或動物體內，能夠增強機體對該抗原的特異性免疫應答，發揮輔助作用的物質。佐劑是疫苗的主要組成成分，在疫苗的質量提高和改進中扮演著重要的作用。?

白介素2（Interleukine-2，IL-2）是一種多種功能的細胞因子，能夠通過自分泌或旁分泌形式作用于一些細胞的表面，從而啟動機體內細胞的信號通路，發揮免疫調節作用。IL-2是由T細胞產生的多功能的活性糖蛋白，能夠促進T、B淋巴細胞的增殖；增強細胞毒T細胞的殺傷活性；促進免疫球蛋白的產生；刺激許多免疫細胞產生多種細胞因子；能夠增強機體的細胞和體液免疫應答。近年來研究表明，IL-2可提高機體對疫苗的免疫應答和控制疾病的發生。可應用于多種疫苗中作為免疫增強劑，如豬口蹄疫疫苗、流感疫苗、狂犬病疫苗、皰疹病毒疫苗等。國外學者報道了單次或多次注射重組牛IL-2對BHV-1副流感病毒二聯苗及牛病毒腹瀉病毒苗的作用，結果表明單次或多次注射均可增強兩種疫苗的免疫效果，但是多次注射效果會更好。這些研究表明重組IL-2作為疫苗分子佐劑，不僅能夠高效特異地調節機體對疫苗的反應，而且可調節體液和細胞免疫應答（lofthouse?S?A,?et?al,1996）。然而重組蛋白用于疫苗佐劑也存在以下的缺點：半衰期較短，易受內外環境的影響而活性降低，需要多次注射；另外，一次性大劑量的使用還可導致發熱、炎癥等副作用，這都給細胞因子重組蛋白在臨床實踐應用中帶來不便。?

發明內容

本發明提供一種含有重組豬白介素2的豬用亞洲I型口蹄疫病毒滅活疫苗佐劑，本佐劑克服現有重組pIL-2作為疫苗佐劑的不足，而且具有安全、高效、廉價的優點；同時提供一種這種佐劑的制備方法。?

本發明的一種豬用亞洲I型口蹄疫病毒滅活疫苗佐劑，這種佐劑是由豬白介素2被一種脂質基質和乳化劑包裹構成的粒徑為50-1000nm的納米顆粒。?

本發明的豬用亞洲I型口蹄疫病毒滅活疫苗佐劑所用的脂質基質為氫化蓖麻油，所用的乳化劑為聚乙丙交脂和聚乙烯醇，所用的豬白介素2為酵母表達系統表達的重組蛋白。?

本發明的豬用亞洲I型口蹄疫病毒滅活疫苗佐劑是由10重量份的氫化蓖麻油和2重量份的聚乙丙交脂包裹0.5-1重量份的重組pIL-2。?

本發明的佐劑可用于亞洲I型口蹄疫病毒滅活抗原混合物構成的亞洲亞洲I型口蹄疫病毒滅活疫苗。?

本發明的佐劑的制備方法采用了復乳溶劑揮發法制備。一種具體的制備方法是：將100mg的氫化蓖麻油和20mg的聚乙丙交脂溶于1mL的三氯甲烷中作為有機相，將該有機相加熱到30-40℃；純化后的重組pIL-2溶于pH=8的磷酸緩沖液中，使終濃度為20mg-50mg/ml；取200μL的前述液體為水相，然后在充分攪拌條件下把水相緩慢加入到前述的有機相中，冰浴中超聲形成（w/o）相的乳液，將制備好的該乳液加入到5mL的1%的聚乙烯醇水溶液中，進一步的利用乳化儀乳化形成（w/o/w）相的乳液，再在室溫下充分攪拌，使有機溶劑完全揮發，固化得到聚合物納米粒分散體系，加入5-10倍體積的滅菌水收集納米粒，并用3～5mL的蒸餾水重懸，冷凍干燥獲得所要的佐劑。?

本發明實際上是一種固體脂質納米粒（Solid?Lipid?Nanoparticle，SLN）。SLN是一類以固態天然或半合成類酯（如卵磷脂）、脂肪酸（如硬脂酸）或甘油三脂等廣義脂質為載體原料，利用不同方法制成粒徑為50-1000nm的固態膠粒給藥體系。與脂質體和微乳相比目前的產物由于被包封于SLN的固體骨架中而實現了更好的控釋和緩釋效果；其最突出的優點在于它具有固態基質，這樣可以保護化學性質不穩定的物質不被分解破壞，并可以調節藥物的釋放。由于在制備過程中蘊含了大規模生產的基礎，使SLN更具有吸引力。?