[發明專利]川西云杉體細胞胚胎發生與植株再生方法

有效

• 申請號: 201210274334.9
• 申請日: 2012-08-02
• 公開（公告）號: CN102771393A
• 公開（公告）日: 2012-11-14
• 發明（設計）人: 王軍輝
• 申請（專利權）人: 中國林業科學研究院林業研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

1.一種川西云杉體細胞胚胎發生與植株再生方法，其特征在于，包括：采集川西云杉自由授粉無性系球果，分離出未成熟合子胚進行體胚發生培養；所述體胚發生培養包括四個階段：胚性愈傷組織誘導階段、胚性愈傷組織增殖階段、體細胞胚成熟階段和體細胞胚萌發階段。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述胚性愈傷組織誘導階段，采用1/2LM基本培養基，其附加激素為：0.55~2.2mg/L的2,4-氯化苯氧乙酸，0~1.1mg/L的6-芐基氨基嘌呤和0~0.44mg/L的6-糖基氨基嘌呤；2,4-氯化苯氧乙酸優選2.2mg/L，6-芐基氨基嘌呤優選0.55~1.1mg/L，6-糖基氨基嘌呤優選0~22mg/L。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述胚性愈傷組織增殖階段，采用1/2LM基本培養基，其附加激素為：0.55~2.2mg/L的2,4-氯化苯氧乙酸，0~1.1mg/L的6-芐基氨基嘌呤和0~0.44mg/L的6-糖基氨基嘌呤；2,4-氯化苯氧乙酸優選2.2mg/L；6-芐基氨基嘌呤優選0.8～1.1mg/L，6-糖基氨基嘌呤優選0~0.44mg/L。

4.根據權利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述胚性愈傷組織誘導階段和增殖階段的培養基中，均還包括：1%的蔗糖，500mg/L的谷氨酰胺，1g/L的酶解酪蛋白和0.2%的植物凝膠。

5.根據權利要求1~4任意一項所述的方法，其特征在于，在胚性愈傷組織增殖階段之后，還包括：胚性愈傷組織的狀態調整階段，為采用1/2LM基本培養基，不添加任何激素進行培養7天。

6.根據權利要求1~5任意一項所述的方法，其特征在于，所述體細胞胚成熟階段：采用1/2LM基本培養基，其附加12~20mg/L的丙烯基乙基巴比妥酸和0~1%的活性炭；所述ABA優選16~20mg/L，活性炭優選0.4~0.8%。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述體細胞胚成熟階段的培養基中，還包括：0.6%的植物凝膠，6%的蔗糖，500mg/L的谷氨酰胺和1g/L的水解酪蛋白。

8.根據權利要求1~7任意一項所述的方法，其特征在于，所述體細胞胚萌發階段，采用1/4LM基本培養基，其附加：0~0.25%的活性炭，優選0.125~0.25%。

9.根據權利要求8任意一項所述的方法，其特征在于，所述體細胞胚萌發階段的培養基中，還包括：谷氨酰胺500mg/L，2%蔗糖、1g/L水解酪蛋白和0.4%植物凝膠。

10.根據權利要求1~9任意一項所述的方法，其特征在于，該方法在對未成熟合子胚進行體胚發生培養前，還包括：對球果進行消毒，然后在無菌的環境下取出未成熟合子胚；所述消毒方式為：利用75~95%的乙醇對球果消毒15~20min，再用無菌水沖洗3~4次；優選利用95%的乙醇消毒對球果15min，再用無菌水沖洗3次。