[發明專利]一種二氧化氯對劍麻外植體材料消毒的方法

無效

• 申請號: 201210272967.6
• 申請日: 2012-08-02
• 公開（公告）號: CN102742506A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發明（設計）人: 梁鉀賢;揭進;劉偉清
• 申請（專利權）人: 廣東海洋大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州市南鋒專利事務所有限公司 44228
• 代理人: 劉廣生

技術領域

本發明涉及一種植物培養材料的消毒方法，具體說涉及一種利用二氧化氯對劍麻珠芽的外植體材料的消毒方法，屬于植物組織培養技術的領域。

背景技術

近年來，植物種苗無菌培養快繁技術在農業生產上迅速發展，植物組織培養外植體材料的消毒滅菌多采用1000~2000mg/L的?HgCl₂(升汞)溶液，以及次氯酸鈉、過氧化氫、酒精、抗生素等，這些殺菌劑處理后很難徹底去除或效果較差，使用操作也較繁瑣，工作效率低。

劍麻外植體的傳統消毒方法采用含有Hg²⁺的消毒劑，對環境和人體的毒性較大，使用程序繁瑣，工作效率低，并且初代培養增殖率低，繼代周期較長，導致繁殖速度緩慢，并且因長時間繼代增殖而導致繁殖體玻璃化程度顯著增高，再生種苗移栽成活率低，嚴重阻礙劍麻快繁種苗的產量和質量提高。劍麻組培快繁為保證繁殖種苗質量而必須在短時間內建立足夠數量的無菌繁殖體，因此要消毒較多的珠芽材料，殺菌劑及無菌水等用量大，成本費用高，滅菌操作工作量大。

二氧化氯是目前國際上公認的的高效、廣譜、快速、安全、無殘留、不污染環境的第四代滅菌消毒劑，可殺滅一切微生物，包括細菌繁殖體、細菌芽孢、真菌、分枝桿菌和病毒等，且微生物不會產生抗藥性。二氧化氯對微生物細胞壁有較強的吸附穿透能力，可有效地氧化細胞內含巰基的酶，還可快速地抑制微生物的蛋白質合成。滅菌效果比一般含氯消毒劑高2.5倍，而且在殺菌消毒過程中對人畜等高等生物無害，無致癌、致畸、致突變性，是一種安全、可靠的高效環保型殺菌消毒劑。

在農業領域二氧化氯已廣泛用于禽畜飼養場舍及飲水的消毒、蠶繭養殖器具消毒、魚蝦疾病防治、池水消毒與增氧、殺滅毛蚶甲肝病毒及磨菇生產滅菌消毒保鮮處理，也有用于葉菜和鮮切花采收后滅菌保鮮儲存處理。但少見有關二氧化氯在植物無菌培養技術方面的應用。

國內2006年首先報道了ClO₂對無籽西瓜種子進行表面消毒滅菌用于組培快繁研究，2009年梁鉀賢等報道了用ClO₂對香蕉以吸芽為材料的外植體進行消毒滅菌取得了重大成功，并在香蕉種苗生產中取得了很好的效益。到目前為止，國內外利用ClO₂對劍麻外植體材料進行消毒滅菌的研究未見報道。

劍麻（Agavee?sisalana?Perr.ex?Engelm）是一種熱帶多年生硬質纖維作物，其纖維色澤潔白，具有質地堅韌，拉力強，耐磨擦等眾多優點，廣泛應用于漁業、航海、工礦、運輸、油田等行業，以及用于編織劍麻地毯、劍麻布、過濾器、工藝品等?。劍麻綜合用途廣，是寶貴的熱作資源。

劍麻組培快繁，需要建立以珠芽莖尖分生組織為材料的無菌外植體，為保證繁殖種苗質量，必須建立足夠數量的無菌外植體。因此要消毒較多的珠芽材料，殺菌劑及無菌水等用量大，成本費用高，滅菌操作工作量大。劍麻外植體的消毒通常采用1000mg/L的HgCl₂溶液浸泡20min，無菌水沖洗5次，消毒劑的Hg²⁺對環境和人體的毒性較大，使用時需要做足防護措施，程序繁瑣，工作效率低，而且初代培養增殖率低，繼代周期較長。采用ClO₂溶液對植物組織培養外植體材料消毒滅菌具有程序簡單、環保無害、工作效率高等優點，為探討應用ClO₂建立高效、環保的劍麻外植體的消毒方法，發明人對此進行了研究。

發明內容

本發明的目的在于針對劍麻外植體傳統消毒技術，消毒劑的Hg²⁺對環境和人體的毒性較大，使用時需要做足防護措施，程序繁瑣，工作效率低，而且初代培養增殖率低，繼代周期較長等問題，提供一種具有方法程序簡單、環保、高效，腋芽萌動生長快，初代繁殖系數高等特點的二劍麻外植體材料消毒的方法，該方法采用二氧化氯對劍麻珠芽外植體材料進行浸泡消毒。

本發明的上述目的是通過如下方案予以實現的：

一種二氧化氯對劍麻外植體材料消毒的方法，包括如下步驟：

???（1）劍麻外植體材料的準備

選擇劍麻的優良珠芽經培育生長有6~10片葉的植株，于晴天取回組培工作間，用水沖掉泥土和雜物后，切除根，環剝除葉片備用；

???（2）配制二氧化氯溶液

????按照使用量配制活化二氧化氯溶液,?二氧化氯溶液濃度為500-3000mg/L；

???（3）外植體消毒滅菌