[發(fā)明專利]凝固酶原以及使用所述酶檢測內(nèi)毒素或(1→3)-β-D-葡聚糖的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210272731.2
• 申請日: 2007-07-06
• 公開（公告）號: CN103060349A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 田村弘志;高橋昭治
• 申請（專利權(quán)）人: 生化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社
• 主分類號: C12N15/57
• 分類號: C12N15/57;C12N15/86;C12N15/866;C12N5/10;C12N9/74;C12Q1/56;C12Q1/37
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所 11038
• 代理人: 李英

1.編碼鱟來源的凝固酶原的核酸。

2.權(quán)利要求1所述的核酸，其中所述鱟選自中國鱟（Tachypleus?tridentatus）、美洲鱟（Limulus?Polyphemus）、馬來鱟（Tachypleus?gigas）和圓尾鱟（Tachypleus?rotundicauda）。

3.權(quán)利要求1所述的核酸，其中所述編碼鱟來源的凝固酶原的核酸選自以下（A）～（C）：

（A）編碼含有序列號4所示氨基酸序列的蛋白質(zhì)的DNA、

（B）編碼“含有序列號4所示氨基酸序列中1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、取代、插入或移位了的氨基酸序列且具有鱟來源的凝固酶原活性的蛋白質(zhì)”的DNA、

（C）由上述（A）或（B）的DNA轉(zhuǎn)錄得到的RNA。

4.權(quán)利要求1所述的核酸，其中所述編碼鱟來源的凝固酶原的核酸選自以下（a）～（c）：

（a）含有序列號3的堿基序列1～1143所示的堿基序列的DNA、

（b）具有下述特征的DNA：在含有序列號3的堿基序列1～1143所示的堿基序列的堿基序列上，具有使由所述堿基序列編碼的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、取代、插入或移位的堿基變異，且所表達(dá)的蛋白質(zhì)具有鱟來源的凝固酶原活性，

（c）由上述（a）或（b）的DNA轉(zhuǎn)錄得到的RNA。

5.帶有權(quán)利要求1～4中任一項(xiàng)所述的核酸的病毒。

6.權(quán)利要求5所述的病毒，其中所述病毒為桿狀病毒。

7.權(quán)利要求6所述的病毒，其中所述桿狀病毒為核型多角體病毒。

8.攜帶權(quán)利要求5～7中任一項(xiàng)所述的病毒的細(xì)胞。

9.權(quán)利要求8的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞為昆蟲來源的細(xì)胞。

10.制備鱟來源的凝固酶原的方法，其至少包括使權(quán)利要求8或9所述的細(xì)胞生長，并從其生長物中回收鱟來源的凝固酶原的步驟。

11.根據(jù)權(quán)利要求10的方法制備的凝固酶原。

12.內(nèi)毒素檢測方法，其特征在于：使待檢測內(nèi)毒素的被檢樣品與權(quán)利要求11所述的凝固酶原和“表現(xiàn)出通過與內(nèi)毒素接觸使凝固酶原轉(zhuǎn)化為凝固酶的活性的絲氨酸蛋白酶前體”共存，以伴隨凝固酶原轉(zhuǎn)化為凝固酶的酶活性作為指標(biāo)，對所述樣品中的內(nèi)毒素進(jìn)行檢測。

13.權(quán)利要求12所述的內(nèi)毒素檢測方法，其特征在于：“表現(xiàn)出通過與內(nèi)毒素接觸使凝固酶原轉(zhuǎn)化為凝固酶的活性的絲氨酸蛋白酶前體”是“表現(xiàn)出通過與活性C因子接觸使凝固酶原轉(zhuǎn)化為凝固酶的活性的絲氨酸蛋白酶前體”和鱟來源的C因子和/或重組C因子。

14.權(quán)利要求13所述的內(nèi)毒素檢測方法，其特征在于：“表現(xiàn)出通過與活性C因子接觸使凝固酶原轉(zhuǎn)化為凝固酶的活性的絲氨酸蛋白酶前體”是鱟來源的B因子和/或重組B因子。

15.權(quán)利要求12～14中任一項(xiàng)所述的內(nèi)毒素檢測方法，其特征在于：僅使作為級聯(lián)反應(yīng)蛋白質(zhì)的權(quán)利要求11所述的凝固酶原、重組C因子和重組B因子共存。

16.用于實(shí)施權(quán)利要求12所述的檢測方法的內(nèi)毒素檢測試劑盒，其特征在于：其組分至少含有權(quán)利要求11的凝固酶原和“表現(xiàn)出通過與內(nèi)毒素接觸使凝固酶原轉(zhuǎn)化為凝固酶的活性的絲氨酸蛋白酶前體”。

17.權(quán)利要求16所述的內(nèi)毒素檢測試劑盒，其特征在于：“表現(xiàn)出通過與內(nèi)毒素接觸使凝固酶原轉(zhuǎn)化為凝固酶的活性的絲氨酸蛋白酶前體”是“表現(xiàn)出通過與活性C因子接觸使凝固酶原轉(zhuǎn)化為凝固酶的活性的絲氨酸蛋白酶前體”和鱟來源的C因子和/或重組C因子。

18.權(quán)利要求17所述的內(nèi)毒素檢測試劑盒，其特征在于：“表現(xiàn)出通過與活性C因子接觸使凝固酶原轉(zhuǎn)化為凝固酶的活性的絲氨酸蛋白酶前體”是鱟來源的B因子和/或重組B因子。

19.權(quán)利要求16～18中任一項(xiàng)所述的內(nèi)毒素檢測試劑盒，其特征在于：其組分僅含有作為級聯(lián)反應(yīng)蛋白質(zhì)的權(quán)利要求11所述的凝固酶原、重組C因子和重組B因子。