[發(fā)明專利]纈酪肽片段及其制備方法和用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210271817.3
• 申請日: 2012-08-01
• 公開（公告）號: CN102838669A
• 公開（公告）日: 2012-12-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李臣鴻;汪俊漢;陳正望
• 申請（專利權(quán)）人: 中南民族大學(xué)
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K1/16;C07K1/14;A61K38/17;A61P3/10
• 代理公司: 武漢華旭知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所 42214
• 代理人: 劉榮

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種纈酪肽截短后的片段，該多肽片段具有刺激分泌胰島素的作用，本發(fā)明同時還提供了上述多肽片段的制備方法。

背景技術(shù)

纈酪肽是一種二十五肽，由二十五個氨基酸通過肽鍵連接而成，最初在豬小腸中分離而得，目前主要應(yīng)用于治療消化系統(tǒng)的腫瘤中。

糖尿病是一種血液中的葡萄糖容易堆積過多的疾病。國外給它的別名為“沉默的殺手”（Silent?Killer），特別是成人型糖尿病。四十歲以上的中年人染患率特別高，在日本，四十歲以上的人口中發(fā)病率占10%，即十人當(dāng)中就有一位糖尿病患者，一旦患上糖尿病，將減少壽命十年之多，可能發(fā)生的并發(fā)癥遍及全身。目前主要治療糖尿病的藥物都是促進(jìn)胰島素分泌的藥物和直接補(bǔ)充胰島素，但是這些藥物要么效果不好要么會產(chǎn)生胰島素抵抗性。所以尋找新的治療糖尿病的藥物一直在進(jìn)行中。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種多肽片段，經(jīng)檢測后發(fā)現(xiàn)其為纈酪肽的截?cái)嗪蟮钠危衫i酪肽3～25位的氨基酸殘基組成，其氨基酸序列如下：YPVEHPDKFLKFGMTPSKGVLFY。

本發(fā)明同時還提供了如上所述的多肽在生物醫(yī)藥上被認(rèn)可的經(jīng)化學(xué)修飾后的多肽。

本發(fā)明提供了上述多肽的制備方法，包括以下步驟：（1）、將豬腸道洗凈后浸入沸水中浸泡3～7分鐘，浸泡完成后取出冷凍并剁碎，然后在0～10°C條件下用醋酸對腸道進(jìn)行浸取后過濾得浸出液，用鹽酸對浸出液中的浸出物洗脫并抽濾得耐熱腸多肽；

（2）、將耐熱腸多肽溶解于水中，加入抗氧化劑及足量異丙醇溶液，室溫下充分靜置后離心除去沉淀，然后再加入足量溫度為-25℃～-15℃的異丙醇溶液并在-25℃～-15℃條件下充分靜置后抽濾去除沉淀，將所得濾液的PH值調(diào)節(jié)為5.8～6.1，再在-25℃～-15℃條件下充分靜置后抽濾得白色沉淀，將白色沉淀充分洗滌后即制得粗肽；

（3）、將步驟（2）中制得的粗肽溶解于醋酸溶液中制得肽溶液，將肽溶液過柱層析分離得到分離物，選取分離物中具有刺激胰腺分泌胰島素功能的一份，將其凍干即得粗提取物；

（4）、將粗提取物溶解于碳酸氫銨溶液中并攪拌，離心后去除沉淀得上清液，將所得上清液過柱層析并采用PH值為8.0、濃度為0.02mol/L的碳酸氫銨溶液進(jìn)行洗滌，洗滌后得到的洗滌物凍干，再將洗滌物經(jīng)過兩次高效液相色譜分離后，將分離物凍干即制得權(quán)利要求1所述氨基酸序列的多肽。

步驟（1）中醋酸的濃度為0.5mol/L，鹽酸的濃度為0.2mol/L。

步驟（2）中抗氧化劑為硫二甘醇，添加量為1.2毫升；洗滌分兩次進(jìn)行，第一次洗滌選用異丙醇溶液，第二次洗滌選用乙醚溶液，第二次洗滌完成后將白色沉淀放入真空環(huán)境中使乙醚在真空中蒸發(fā)。

所述步驟（4）中的兩次高效液相色譜分離中，第一次分離所用洗提液為0.1％的三氟乙酸水溶液，第二次分離所用洗提液為0.1％的三氟乙酸的乙腈溶液。

本發(fā)明同時還提供了上述多肽及其藥學(xué)上可接受的鹽的用途，用于制造刺激胰腺分泌胰島素的藥物。

本發(fā)明提供的多肽以及其在生物醫(yī)藥上被認(rèn)可的經(jīng)修飾后的多肽，能夠有效的刺激胰腺細(xì)胞分泌胰島素，與目前的治療糖尿病藥物中采用最多的高糖相比，本發(fā)明提供的多肽的效果更明顯。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中的粗肽層析分離結(jié)果圖；

圖2為本發(fā)明實(shí)施例1中第二次高效液相色譜分離結(jié)果圖；

圖3為本發(fā)明提供的多肽的氨基酸序列圖；

圖4為本發(fā)明提供的胰腺刺激試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明做詳細(xì)具體的說明。

實(shí)施例1

本實(shí)施例中采用以下制備步驟：

（1）、取30千克新鮮豬腸，將豬腸道洗凈后浸入沸水中浸泡4分鐘，浸泡完成后取出冷凍并剁碎，然后在5°C條件下用0.5mol/L的醋酸對腸道進(jìn)行浸取后過濾得浸出液，然后用0.2mol/L的鹽酸對浸出液中的浸出物洗脫并抽濾得耐熱腸多肽約30克，耐熱腸多肽的產(chǎn)率約為豬腸濕重的0.01%。