[發明專利]一株不動桿菌及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 201210271764.5
• 申請日: 2012-08-01
• 公開（公告）號: CN102851236A
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發明（設計）人: 沈健英;孫秀敏
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C02F3/34;C12R1/01
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 楊元焱

技術領域

本發明涉及生物技術，具體涉及一株不動桿菌及其構建方法和應用。?

背景技術

水體富營養化已成為困擾世界各國的普遍性環境問題。浮游藻類的大量繁殖導致水華的頻繁爆發，嚴重影響了人類的生活、生產和身體健康，造成了世界范圍內的生態災害，探索控制水華發生的有效途徑已迫在眉睫。目前治理水體富營養化主要是采用物理和化學方法，但這兩種方法不僅會消耗大量的財力和物力，而且會在一定程度上破壞生態環境。溶藻菌作為水華和赤潮的防治生物，日益受到國內外環境工作者的廣泛關注。國外對溶藻菌的研究已有數十年的歷史，自Geitler報道一種寄生在剛毛藻上的粘細菌以來，陸續有溶藻菌的相關報道，研究重點也逐漸從單一溶藻菌的篩選及溶藻特性研究過渡到菌---藻種群生態學及分子調控機理等方面。目前，國內對溶藻細菌的研究還處于初始階段，因此，尋找高效溶藻菌對溶藻菌的深入研究及應用具有重要意義。?

水華魚腥藻是導致水體富營養化的主要藻種之一，分布廣，能夠產生藻毒素，直接和間接危害人類，然截止目前，利用微生物方式控制水華魚腥藻的研究甚是罕見。為此，本發明通過分離純化高效溶藻菌株，探討該溶藻菌株對水華魚腥藻的生長效應和光合色素的影響，對于安全、經濟、高效的控制水體富營養化、治理水華具有重要的科學實踐價值。?

發明內容

本發明的目的之一是提供一種不動桿菌；本發明的目的之二是提供一種利用微生物去除水華魚腥藻(引起水華的常見藻類)的方法，以消除當前水華中水華魚腥藻的大量繁殖帶來的環境污染問題。?

本發明中的不動桿菌從農業部都市農業(南方)重點實驗室黃化的水華魚腥藻?液中分離篩選并獲得，已于2012年6月6日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱CGMCC，地址：中國北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所。保藏編號為CGMCC?No.6196。其分類命名為：不動桿菌，拉丁名：Acinetobacter?sp.。?

為了實現上述目的，本發明采用了以下技術方案：一株不動桿菌，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示，命名為Acinetobacter?SSAL-8。?

上述不動桿菌的構建方法，包括以下步驟：?

A、以黃化的水華魚腥藻液作為溶藻細菌的分離源，采用涂布平板法及分區劃線法多次純化分離得到25株溶藻細菌；?

B、將分離獲得的25株溶藻細菌分別置于100mL?LB液體培養基中，在180r·min^-1、37℃下培養24h；?

C、將經過培養的25株溶藻細菌分別取800μL滴加到水華魚腥藻固體平板上，通過溶藻斑的大小考察、比較各菌的溶藻效果，最終篩選出具有較高溶藻效應的菌株SSAL-8，經鑒定為芽孢桿菌，命名為Acinetobacter?SSAL-8；?

D、將菌株Acinetobacter?SSAL-8接入斜面培養基，于4℃擴大培養制成菌懸液；?

E、將菌懸液加入到滅菌的甘油中，甘油的最終濃度為25％，放入-80℃的冰箱保藏。?

上述的不動桿菌的構建方法，其中，所述的LB液體培養基的組分及含量為：酵母提取物，5g；胰蛋白胨，10g；NaCl，10g；蒸餾水1000mL；pH7.0-7.2。?

上述的不動桿菌的構建方法，其中，所述的斜面培養基的組分及含量為：磷酸氫二鉀(K₂HPO₄)，0.075g；硫酸鎂(MgSO₄·H₂O)，0.125g；碳酸鈣(CaCO₃)，0.100g；檸檬酸鐵(1％水溶液)，0.5mL；檸檬酸(1％水溶液)，0.5mL；鉬酸(1％水溶液)，5滴；氫氧化鈉(1％水溶液)，1.5mL；瓊脂粉，15g；蒸餾水，1000mL。?

上述不動桿菌用于降解水華魚腥藻，其降解效果隨菌株濃度的增大而增加，當菌株的濃度為35％時，對水華魚腥藻葉綠素a的抑制率達91％。?

附圖說明

圖1為不動桿菌Acinetobacter?SSAL-8對水華魚腥藻細胞數的影響；?

圖2為不動桿菌Acinetobacter?SSAL-8對水華魚腥藻干重的影響；?

圖3為不動桿菌Acinetobacter?SSAL-8對水華魚腥藻色素吸收光譜的影響；?

圖4為不動桿菌Acinetobacter?SSAL-8對水華魚腥藻葉綠素a的影響。?

具體實施方式