[發(fā)明專利]一種快速檢測(cè)豬巨細(xì)胞病毒的LAMP試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210271637.5
• 申請(qǐng)日: 2012-08-02
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102925588A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-02-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐志文;朱玲;廖春燕;楊宏偉;周遠(yuǎn)成
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué);四川省歐邦動(dòng)物藥業(yè)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/70
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種快速檢測(cè)豬巨細(xì)胞病毒的LAMP試劑盒，其特征在于，每個(gè)反應(yīng)用量為23μL的LAMP反應(yīng)液和1μL的BstDNA聚合酶，該23μL的LAMP反應(yīng)液中各組分及濃度如下：2.5μL的聚合酶緩沖液，3mM的MgSO₄，1M甜菜堿，0.4mMdNTP，0.25mM引物F3，0.25mM引物B3，2mM引物FIP，2mM引物BIP；其中，所述2.5μL的聚合酶緩沖液的組分及濃度為：20mM?Tris-HCl、其pH?8.8，10mM?KCl，10mM(NH₄)₂SO₄，，1％Triton?X-100；

其中各引物序列為：

F3：AAAAATATAGTTCCGCACACT；

B3：TTTCTAATCTCGGCAGCG；

FIP：TGACATGAACGTCTCTATACGTCGTTTTTTTTTTGTTAGGACGTATACCA；

BIP：TGATAGGTCTTCATATAAAGTGCCCTTTTGACCATTCAAATTTATATATCCAGC。

2.權(quán)利要求1中LAMP試劑盒的使用方法包括如下步驟：

(1)運(yùn)用無(wú)菌雙蒸水配制上述23μL的LAMP反應(yīng)液于反應(yīng)管中；

(2)取1μL待檢測(cè)基因組DNA于步驟(1)中23μL的LAMP反應(yīng)液中，在95℃條件下作用10min使基因組DNA解鏈為單鏈狀態(tài)，作用完成后將反應(yīng)管置于冰上，使其快速冷卻；

(3)于步驟(2)冷卻的反應(yīng)管中加入1μL的BstDNA聚合酶，使終反應(yīng)體積為25μL上下顛倒混勻數(shù)次，再10000rpm瞬時(shí)離心0.5min，使反應(yīng)液全部沉到管底；

(4)將步驟(3)中所得反應(yīng)物于65℃恒溫水浴鍋中，反應(yīng)60min；

(5)反應(yīng)完畢后取出反應(yīng)管12000rpm離心1min，通過(guò)觀察管底是否有沉淀，或取4μl反應(yīng)終產(chǎn)物于2％瓊脂糖凝膠中電泳30min后于紫外燈下觀察電泳圖像來(lái)判斷陰陽(yáng)性。