[發明專利]利用基因芯片進行不同疾病檢測的方法

無效

• 申請號: 201210269060.4
• 申請日: 2012-07-30
• 公開（公告）號: CN103571935A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發明（設計）人: 黃健;肖華勝
• 申請（專利權）人: 上海生物芯片有限公司;上海伯豪生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海浦一知識產權代理有限公司 31211
• 代理人: 高月紅

技術領域

本發明涉及一種檢測方法，特別是涉及一種利用基因芯片進行不同疾病檢測的方法。

背景技術

基因芯片是人類基因組計劃帶來的最具應用價值的科研成果，它融合了生命科學、化學、微電子技術、計算機科學、統計學和生命信息學等多種學科的最新技術。隨著微加工技術的發展，高密度寡核苷酸芯片最高密度可達上百萬個探針，因此，基因芯片通量水平并不受芯片技術本身制約，而是受樣本的處理和基因芯片設計方法的限制。基因芯片作為一種高通量的、先進的分子生物學技術，可應用于疾病基因表達變化的檢測，其具有高度的靈敏性和準確性、快速便捷、并可同時檢測多個基因表達變化等優點。

利用基因芯片技術，開發一種快速檢測不同疾病的方法，有利于對不同疾病，尤其是癌癥的早期進行有效診斷，降低死亡率。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種利用基因芯片進行不同疾病檢測的方法。通過該方法，可對不同疾病進行有效檢測，以提高治愈率，降低死亡率。

為解決上述技術問題，本發明的利用基因芯片進行不同疾病檢測的方法，包括步驟：

(1)抽提待測樣品（包括血液樣本）的總RNA，純化總RNA；

(2)反轉錄合成cDNA，標記cRNA的合成、純化；

(3)cRNA片段化；

(4)與帶有疾病相關基因檢測探針的基因芯片進行雜交，洗滌，芯片掃描，檢測雜交反應的結果。

所述步驟(2)中，標記采用熒光素標記、生物素標記、電化學發光標記、放射性元素標記或酶標記，優選生物素標記。

所述步驟(4)中，雜交溫度為25℃～72℃，雜交時間為1分鐘～18小時，優選45℃雜交

16小時。

本發明操作簡單，通量水平更高，費用低廉，同時，可為不同疾病，尤其是癌癥的發生發展早期進行有效診斷，以提高治愈率，降低死亡率，具有良好的臨床應用前景。

附圖說明

下面結合附圖與具體實施方式對本發明作進一步詳細的說明：

圖1是實施例中的貼膜示意圖；

圖2是實施例中的掃描圖像示意圖；

圖3是實施例中的不同樣本的K-Means聚類分析結果圖，其中，1-4為正常人、5-7為肝癌患者，8-10為肝炎患者，11-13為腸癌患者；

圖4是實施例中的不同樣本的主成分分析結果（PCA）圖。

具體實施方式

以下實施例中使用的TRIzol試劑、PCR試劑等采用商業產品，具體操作按照說明書進行。其他未注明的實驗操作，可按照常規分子生物學操作方法進行。

實施例1

一、第一鏈cDNA合成

1、樣品：4個正常人、3個肝癌患者、3個肝炎患者、3個腸癌患者的靜脈血。其中，正常人、肝癌、肝炎、腸癌的診斷標準，依據臨床標準。

調整總RNA的濃度到83ng/μL。其中，靜脈血的總RNA的抽提采用TRIzol法，總RNA的純化可采用商業化的試劑盒進行。

2、制備Poly-A?RNA質控

A、第一次稀釋：加2μL?of?the?Poly-A?Control?Stock到38μLof?Poly-A?Control?Dil?Buffer中（1:20）。混勻，輕甩。收集液體到管底。

B、第二次稀釋：加2μL第一次的稀釋液到98μL?of?Poly-A?Control?DilBuffer中（1:50）。混勻，輕甩。收集液體到管底。

C、第三次稀釋：加2μL第二次的稀釋液到98μL?of?Poly-A?Control?Dil?Buffer中（1:50）。混勻，輕甩。收集液體到管底。

D、第四次稀釋：加40μL第三次的稀釋液到120μL?of?Poly-A?Control?Dil?Buffer中（1:4）。混勻，輕甩。收集液體到管底。

3、按下表1配制一鏈反應混合液

表1

4、分裝7μL上述混合液至反應管中。

5、加3μL濃度調整到83ng/μL的總RNA到上述步驟4的反應管中。

6、輕柔混和，瞬時離心后，42℃孵育2小時。

7、孵育結束后，瞬時離心收集液體至管底，把樣品放在冰上，立即進行第二鏈合成。

二、第二鏈cDNA合成

1、按照下表2準備Second-Strand?Master?Mix：

表2

2、加20μL以上混合液到所有的反應管中，至總體積30μL，混勻。