[發(fā)明專利]一種視網(wǎng)膜祖細(xì)胞培養(yǎng)方法及其培養(yǎng)基

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210268933.X
• 申請(qǐng)日: 2012-07-30
• 公開（公告）號(hào): CN102747029A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王卓實(shí);張明琦;徐玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 何偉
• 主分類號(hào): C12N5/071
• 分類號(hào): C12N5/071;C12N5/0797
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 馮瓊

1.一種細(xì)胞培養(yǎng)方法，包含以下步驟：

步驟1：取海藻酸鈉粉末與溶劑混合，混合均勻加熱制成海藻酸鈉凝膠，滅菌備用；

步驟2：收集成球培養(yǎng)的細(xì)胞，離心取沉淀，用培養(yǎng)基混勻細(xì)胞，種植在鋪有海藻酸鈉凝膠的細(xì)胞培養(yǎng)裝置中進(jìn)行培養(yǎng)；

所述培養(yǎng)基配方為DMEM/F12培養(yǎng)液，添加終濃度為1:100的N-2添加物，終濃度為10-20ng/ml的表皮生長(zhǎng)因子EGF，終濃度為10-20ng/ml堿性生長(zhǎng)因子bFGF，終濃度為10-20ng/ml的三碘甲狀腺氨酸T3、終濃度為10-20ng/ml的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素NT4、終濃度為10-20ng/ml神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF、終濃度為10-20ng/ml神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)NF3以及終濃度2mmol/l?L-谷氨酰胺制成。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞培養(yǎng)方法，其特征在于，所述細(xì)胞為視網(wǎng)膜祖細(xì)胞或神經(jīng)干細(xì)胞。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞培養(yǎng)方法，其特征在于，所述培養(yǎng)基配方為DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加終濃度為1:100的N-2添加物，終濃度為10ng/ml的表皮生長(zhǎng)因子EGF，終濃度為10ng/ml堿性生長(zhǎng)因子bFGF，終濃度為20ng/ml的三碘甲狀腺氨酸T3、終濃度為20ng/ml的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素NT4、終濃度為20ng/ml神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF、終濃度為20ng/ml神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)NF3以及終濃度2mmol/l?L-谷氨酰胺制成。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞培養(yǎng)方法，其特征在于，所述溶劑為水或平衡鹽溶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的細(xì)胞培養(yǎng)方法，其特征在于，海藻酸鈉粉末與溶劑比例為2:100-5:100。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞培養(yǎng)方法，其特征在于，所述加熱為加熱至55℃。

7.一種細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基配方為：DMEM/F12培養(yǎng)液，添加終濃度為1∶100的N-2添加物，終濃度為10-20ng/ml的表皮生長(zhǎng)因子EGF，終濃度為10-20ng/ml堿性生長(zhǎng)因子bFGF，終濃度為10-20ng/ml的三碘甲狀腺氨酸T3、終濃度為10-20ng/ml的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素NT4、終濃度為10-20ng/ml神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF、終濃度為10-20ng/ml神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)-3NF3以及終濃度2mmol/l?L-谷氨酰胺制成。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基配方為DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加終濃度為1∶100的N-2添加物，終濃度為10ng/ml的表皮生長(zhǎng)因子EGF，終濃度為10ng/ml堿性生長(zhǎng)因子bFGF，終濃度為20ng/ml的三碘甲狀腺氨酸T3、終濃度為20ng/ml的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素NT4、終濃度為20ng/ml神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF、終濃度為20ng/ml神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)NF3以及終濃度2mmol/l?L-谷氨酰胺制成。

9.權(quán)利要求7或8所述培養(yǎng)基在培養(yǎng)視網(wǎng)膜祖細(xì)胞或神經(jīng)干細(xì)胞中的用途。