[發(fā)明專利]沙門菌分離、鑒定的試劑盒、制備和應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210268520.1
• 申請(qǐng)日: 2012-08-01
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102796801A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-11-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 許學(xué)斌;袁政安;金匯明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海市疾病預(yù)防控制中心
• 主分類號(hào): C12Q1/04
• 分類號(hào): C12Q1/04;C12R1/42
• 代理公司: 上海浦東良風(fēng)專利代理有限責(zé)任公司 31113
• 代理人: 張勁風(fēng)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明針對(duì)腸道病原菌中沙門菌屬（包括傷寒、副傷寒和非傷寒、副傷寒沙門菌）的同步分離和鑒定方法，特別涉及利用多種選擇性分離培養(yǎng)基對(duì)應(yīng)生長(zhǎng)的典型菌落形態(tài)、簡(jiǎn)易生化和特異性酶-底物反應(yīng)組合試驗(yàn)鑒定包括傷寒、副傷寒和非傷寒、副傷寒沙門菌在內(nèi)的所有沙門菌（血清型）的試劑盒、制備和應(yīng)用。

背景技術(shù)

沙門菌目前已經(jīng)明確的分類包括2個(gè)模式種，6個(gè)亞種，近2500個(gè)血清型，和人類有關(guān)系的主要為傷寒、副傷寒和非傷寒、副傷寒沙門菌（多屬于亞種Ⅰ），由于傷寒和副傷寒沙門菌的致病特征、生物學(xué)性狀與大多數(shù)的非傷寒、副傷寒沙門菌存在較大的差異，造成許多實(shí)驗(yàn)室在實(shí)際工作中無(wú)法通過(guò)一種簡(jiǎn)單的微生物常規(guī)分離方法達(dá)到同時(shí)分離所有沙門菌病原（血清型）的預(yù)期效果，反而受制于所用培養(yǎng)基的批間質(zhì)控要求繁瑣、敏感性和特異性低以及多次對(duì)疑似菌落篩選和鑒定所用自動(dòng)化生化反應(yīng)試劑材料帶來(lái)的昂貴費(fèi)用，既費(fèi)工又費(fèi)時(shí)；其次，從不同技術(shù)屬性和分工的實(shí)驗(yàn)室能力要求角度考量，存在對(duì)沙門菌（即包括傷寒、副傷寒和非傷寒、副傷寒沙門菌）有著不同側(cè)重、兼而有之的技術(shù)要求和方法的敏感性要求。中國(guó)專利申請(qǐng)201010550372.3公開(kāi)了“沙門菌和志賀菌同步分離、鑒定的試劑盒、制備和應(yīng)用”，具體說(shuō)是一種對(duì)沙門菌和志賀菌同時(shí)進(jìn)行分離、檢測(cè)和鑒定的程序，可應(yīng)用于食品和其它糞便類樣品中沙門菌和志賀菌的同步檢測(cè)。但是該方法篩選病原菌的檢測(cè)流程還存在一定局限性，無(wú)法滿足不同類型實(shí)驗(yàn)室的專業(yè)實(shí)驗(yàn)室的特殊的技術(shù)要求；在處理不同類型的標(biāo)本上沒(méi)有使實(shí)驗(yàn)室的材料與方法的績(jī)效比達(dá)到預(yù)期效果。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一種一次可同步分離傷寒和非傷寒沙門菌的試劑盒、制備和應(yīng)用。主要解決現(xiàn)有沙門菌分離方法存在的漏檢率高、鑒定步驟繁復(fù)且成本較高、篩選結(jié)果不夠直觀的技術(shù)難題。本發(fā)明針對(duì)不同性質(zhì)實(shí)驗(yàn)室（臨床實(shí)驗(yàn)室和公共衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)室）需求對(duì)不同類型標(biāo)本分別使用1種或2種不同選擇性增菌液及2種可選擇的專一性分離平板配合簡(jiǎn)單的糖生化發(fā)酵反應(yīng)模式和細(xì)菌特異性酶-底物反應(yīng)特征建立一套行之有效的分離和特異性鑒別試驗(yàn)，達(dá)到對(duì)傷寒、副傷寒和（或）非傷寒、副傷寒沙門菌同步篩選分離和簡(jiǎn)易鑒定的效果，反之，若單純僅需分離非傷寒、副傷寒沙門菌的實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)推薦針的分離程序產(chǎn)生的績(jī)效比更好。

本發(fā)明的技術(shù)方案為：沙門菌分離、鑒定的試劑盒，包括：

1、通用型非選擇性增菌液：胰酪胨大豆胨肉湯（TSB）。成分：胰化酪蛋白胨17.0g，植物蛋白胨3.0g，氯化鈉5.0g，K₂HPO_4?2.5g，葡萄糖2.5g，蒸餾水1000ml，加熱溶解后矯正pH至7.3±0.2（按冷卻至25℃后測(cè)量值為標(biāo)準(zhǔn)）。經(jīng)15磅壓力15分鐘（121℃）滅菌后分裝225mL/瓶備用。

2、10倍濃縮通用型非選擇性增菌液：胰酪胨大豆胨肉湯（TSB）。成分：胰化酪蛋白胨17.0g，植物蛋白胨3.0g，氯化鈉5.0g，K₂HPO_4?2.5g，葡萄糖2.5g，蒸餾水100ml，加熱溶解后矯正pH至7.3±0.2（按冷卻至25℃后測(cè)量值為標(biāo)準(zhǔn)）。經(jīng)15磅壓力15分鐘（121℃）滅菌后分裝10mL/瓶備用。

3、亞硒酸鹽磺綠-磺胺增菌液（SBG）：成分：酵母浸出物5.0g，蛋白胨5.0g，D-甘露醇5.0g，牛磺酸鈉1.0g，磺胺抑制劑0.5g，亞硒酸鈉4.0g，KH₂PO₄2.65g，K₂HPO₄1.02g，磺綠5.0mg，蒸餾水1000ml，加熱溶解后矯正pH至7.2±0.2（按冷卻至25℃后測(cè)量值為標(biāo)準(zhǔn)）。煮沸3次后分裝9mL/無(wú)菌試管備用。其外觀為淡綠色透明液體，適用于傷寒、副傷寒和非傷寒、副傷寒沙門菌的增殖培養(yǎng)。

4、改良羅伯特增菌液（RVS）：成分：氯化鎂13.58g，氯化鈉7.2g，5.0g，木瓜酶消化大豆胨4.5g，KH₂PO₄1.26g，K₂HPO₄0.18g，孔雀綠36mg，蒸餾水1000ml，加熱溶解后矯正pH至5.2±0.2（按冷卻至25℃后測(cè)量值為標(biāo)準(zhǔn)）。煮沸3次后分裝9mL/無(wú)菌試管備用。其外觀為藍(lán)綠色透明液體，適用于非傷寒、副傷寒沙門菌的復(fù)蘇和增殖培養(yǎng)。