[發明專利]簇毛麥6VL染色體上抗稈銹病基因連鎖標記、引物對及用法

無效

• 申請號: 201210268317.4
• 申請日: 2012-07-30
• 公開（公告）號: CN102816760A
• 公開（公告）日: 2012-12-12
• 發明（設計）人: 別同德;王春梅;張勇;張曉祥;高德榮;李海鳳;呂國鋒
• 申請（專利權）人: 江蘇里下河地區農業科學研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 趙秀斌

1.一種簇毛麥6VL染色體上抗稈銹病基因連鎖標記的引物對，其特征在于，所述引物對中的一條引物的脫氧核糖核苷酸序列如序列表中序列SEQ?ID?NO.1所示，所述引物對中的另一條引物的脫氧核糖核苷酸序列如序列表中序列SEQ?ID?NO.2所示。

2.一種簇毛麥6VL染色體上抗稈銹病基因連鎖標記，其特征在于，是采用引物對SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2自簇毛麥DNA中擴增出來的一段358bp的核苷酸序列，所述358bp?DNA片段的脫氧核糖核苷酸序列如序列表中序列SEQ?ID?NO.3所示。

3.根據權利要求2所述一種簇毛麥6VL染色體上抗稈銹病基因連鎖標記，其特征在于，所述引物對擴增出的標記為共顯性標記，既可擴增出簇毛麥6VL染色體特異的的358bp條帶，也可擴增出普通小麥6AL染色體特異的230bp條帶，用于區分抗病單株為純合還是雜合。

4.一種簇毛麥6VL染色體上抗稈銹病基因連鎖標記引物對的用法，其特征在于，采用權力要求1至3任一項所述的引物對對以小麥-簇毛麥T6AS.6VL抗稈銹病易位系為親本的分離群體進行PCR擴增及其產物檢測，若所述擴增產物出現6VL特異的358bp條帶而不出現6AL特異的230bp條帶，則所述待測植物為含有1對T6AS.6VL易位染色體的抗稈銹病純合體；若所述擴增產物同時出現358bp和230bp條帶，則所述待測植物為含有單個T6AS.6VL易位染色體的抗稈銹病雜合體；若所述PCR擴增產物中僅擴增出230bp條帶，則所述待測植物不含T6AS.6VL易位染色體，相應喪失對稈銹病的抗性。

5.根據權利要求4所述的簇毛麥6VL染色體上抗稈銹病基因連鎖標記的用法，其特征在于：

所述PCR擴增的反應體系：10uL反應體系中含約10～20ng模板DNA，1×PCR?buffer，1.5mmol?L^-1MgCl₂，200mmol?L^-1dNTP，左右引物終濃度各為0.2umol?L^-1，0.5U?Taq?DNA聚合酶；

所述PCR擴增的反應程序：94℃預變性3分鐘；94℃變性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸45秒，32個循環；72℃延伸10分鐘；

所述PCR擴增的產物檢測：PCR擴增產物經8％非變性聚丙烯酰胺凝膠上電泳分離，用銀染法染色。