[發(fā)明專利]一種羅氟司特二聚體高效液相檢測(cè)方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210266918.1
• 申請(qǐng)日: 2012-07-31
• 公開（公告）號(hào): CN103575817A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 秦引林;毛黎順
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇柯菲平醫(yī)藥有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/36
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• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種羅氟司特二聚體高效液相檢測(cè)方法，對(duì)羅氟司特的原料及制劑的質(zhì)量控制起到重要的作用，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。?

背景技術(shù)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種嚴(yán)重的慢性呼吸系統(tǒng)疾病，患病人數(shù)多，病死率高。由于其緩慢進(jìn)行性發(fā)展，嚴(yán)重影響患者的勞動(dòng)能力和生活質(zhì)量。COPD患者在急性發(fā)作期過后，臨床癥狀雖有所緩解，但其肺功能仍在繼續(xù)惡化，并且由于自身防御和免疫功能的降低以及外界各種有害因素的影響，經(jīng)常反復(fù)發(fā)作，而逐漸產(chǎn)生各種心肺并發(fā)癥。?

COPD的發(fā)病機(jī)制尚未完全明了。目前普遍認(rèn)為COPD以氣道、肺實(shí)質(zhì)和肺血管的慢性炎癥為特征，在肺的不同部位有肺泡巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞(尤其是CD)和中性粒細(xì)胞增加，部分患者有嗜酸性粒細(xì)胞增多。激活的炎癥細(xì)胞釋放多種介質(zhì)，包括白三烯B4(LTB4)、白細(xì)胞介素8(1L-8)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)和其他介質(zhì)。這些介質(zhì)能破壞肺的結(jié)構(gòu)和(或)促進(jìn)中性粒細(xì)胞炎癥反應(yīng)。除炎癥外，肺部的蛋白酶和抗蛋白酶失衡、氧化與抗氧化失衡以及自主神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂(如膽堿能神經(jīng)受體分布異常)等也在COPD發(fā)病中起重要作用。吸入有害顆粒或氣體可導(dǎo)致肺部炎癥；吸煙能誘導(dǎo)炎癥并直接損害肺臟；COPD的各種危險(xiǎn)因素都可產(chǎn)生類似的炎癥過程，從而導(dǎo)致COPD的發(fā)生.?

羅氟司特選擇性抑制PDE4，阻斷炎癥反應(yīng)信號(hào)傳遞，進(jìn)而抑制如COPD和哮喘等呼吸道疾病對(duì)肺組織造成的損傷：環(huán)核苷酸cAMP和cGMP是細(xì)胞內(nèi)重要的第二信使，在各?種細(xì)胞外信號(hào)包括激素、自體活性物質(zhì)和神經(jīng)遞質(zhì)引起的生物學(xué)反應(yīng)中起重要作用。磷酸二酯酶(PDE)具有水解細(xì)胞內(nèi)cAMP或cGMP的功能，使其轉(zhuǎn)變?yōu)槭セ钚缘膯魏塑账岬年P(guān)鍵酶，是cAMP和cGMP水解的惟一途徑。PDE4是cAMP代謝的主要調(diào)節(jié)者，是炎癥和免疫細(xì)胞的主要PDE同工酶，也是分布于肺部的主要PDE同工酶，是PDE家族中最大的一群，有4個(gè)亞型(PDE4A，B，C，D)。每一亞型來源于1個(gè)不同的基因，并包含多種變異體。各種PDF4分子有3個(gè)高度同源的區(qū)域：水解催化部位位于中心到C端的區(qū)域，以及兩個(gè)上游保守區(qū)(up-stream?conserved?regions，UCR1和UCR2)。PDE4與多種炎性細(xì)胞的cAMP水解有關(guān)。由于cAMP可導(dǎo)致支氣管平滑肌松弛和肺部炎癥反應(yīng)，因此抑制PDE4可減少炎癥介質(zhì)的釋放，進(jìn)而抑制如COPD和哮喘等呼吸道疾病對(duì)肺組織造成的損傷。?

羅氟司特的結(jié)構(gòu)式中含酰胺健，在儲(chǔ)存過程中受溫度、濕度等影響易引起聚合產(chǎn)生二聚體，嚴(yán)重影響羅氟司特藥效的發(fā)揮。在生產(chǎn)與使用的過程中，需要嚴(yán)格的控制羅氟司特原料與制劑中二聚體的含量。而目前尚未有很好的檢測(cè)二聚體的方法。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種羅氟司特二聚體高效液相色譜檢測(cè)方法，該方法體現(xiàn)為能夠科學(xué)、有效、便捷的檢測(cè)羅氟司特中的二聚體。便于對(duì)這羅氟司特的原料及制劑的質(zhì)量控制。?

技術(shù)方案?

羅氟司特：化學(xué)名為3-(環(huán)丙基甲氧基)-N-(3，5-二氯-4-吡啶基)-4-(二氟甲氧基)苯甲酰胺。?

結(jié)構(gòu)式：?

羅氟司特二聚體：

本發(fā)明的液相條件為：?

分析柱：以氨基硅烷鍵合硅膠為填充劑，采用2-4根色譜柱串聯(lián)方式進(jìn)行流動(dòng)相：0.05mol/L磷酸氫二鈉緩沖液(用磷酸調(diào)pH至4.0)-乙腈(50∶50)?

檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm?

附圖說明：

圖1羅氟司特和羅氟司特二聚體色譜圖1?

圖2羅氟司特和羅氟司特二聚體色譜圖2?

圖3羅氟司特和羅氟司特二聚體色譜圖3?

實(shí)施例

下面經(jīng)過試驗(yàn)和試驗(yàn)檢測(cè)，說明本發(fā)明的益處。?

實(shí)施例1?

儀器：島津LC-10A高效液相色譜儀系統(tǒng)，包括LC-10AT泵，SPD-10AVP紫外檢測(cè)器及Lc-SOLUTION色譜工作站；?

試劑：乙腈、色譜純；磷酸二氫鈉、磷酸等，分析純。?

Agilent氨基硅烷鍵合硅膠為填充劑，并采用2根色譜柱串聯(lián)方式進(jìn)行，0.05mol/L磷酸氫二鈉緩沖液(用磷酸調(diào)pH至4.0)-乙腈(50∶50)為流動(dòng)相。檢測(cè)波長(zhǎng)為215nm。流?速0.5mL/min，?

以流動(dòng)相配制含羅氟司特和羅氟司特二聚體各含1mg/mL，進(jìn)樣20ul，記錄色譜圖(圖1)。羅氟司特和羅氟司特二聚體分離度大于1.5，分離度良好。?

實(shí)施例2?