[發明專利]聚乙烯亞胺脂質復合納米載體，其制備方法以及聚乙烯亞胺脂質復合納米基因藥物

無效

• 申請號: 201210261860.1
• 申請日: 2012-07-27
• 公開（公告）號: CN103566374A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發明（設計）人: 王華茂;趙紅霞;梁曉飛;宋波
• 申請（專利權）人: 上海銳勁生物技術有限公司
• 主分類號: A61K47/34
• 分類號: A61K47/34;A61K47/42;A61K9/127;A61K48/00
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技術領域

本發明涉及基因治療的遞送載體領域，具體地，一種脂質體復合載體，其制備方法和包載有藥物的所述載體。?

背景技術

基因治療主要通過向靶細胞或組織中引入外源的DNA或RNA片段以糾正或補償基因的缺陷或抑制異常表達的基因，從而達到治療的目的。在基因治療中，基因遞送技術包括將目的基因、基因片斷或短鏈干擾RNA導入到靶細胞內以達到治療目的的方式。基因遞送技術和用于基因遞送的系統(如載體等)是基因治療的關鍵，也是基因治療從實驗研究階段走向臨床應用階段的重要挑戰。?

理想的基因遞送技術的載體應具備以下特征：(1)靶向特異性；(2)穩定性，容易制備；(3)無毒性；(4)有利于基因高效遞送和長期表達。近年來，陽離子脂質體已經成為基因遞送技術中非常廣泛而具代表性的一種，其屬于非病毒載體。?

伴隨著研究的深入和市場的擴大，各國研究者也在不斷的開發適合市場應用的具有高的基因遞送效率、高的生物相容性、高的體內靶向性的新型基因遞送載體。?

發明內容

本發明的第一方面提供一種聚乙烯亞胺脂質復合納米載體。其是在傳統陽離子脂質體的基因遞送系統的研究基礎上，將脂質體技術與納米聚合物膠束技術結合而構建的，是一種制備簡單、成本低廉、安全性好、轉染效率高的非病毒基因遞送系統。?

本發明另一方面提供一種制備上述聚乙烯亞胺脂質復合納米載體?的方法。?

本發明另一方面提供一種聚乙烯亞胺脂質復合納米基因藥物，其由包載有藥物的上述聚乙烯亞胺脂質復合納米載體構成。?

本發明中的聚乙烯亞胺脂質復合納米載體包含聚乙烯亞胺衍生物和脂質成分，其中聚乙烯亞胺衍生物與脂質成分的質量比為大約0.05∶1-20∶1，優選大約1∶1-8∶1；粒徑為大約1-100,000nm，優選大約10-500nm。?

本發明所述的脂質成分包括膽固醇、二油酰脂酰乙醇胺、3β-N-(N’，N’-二甲基胺乙基)胺基甲酰基]膽固醇、卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰膽堿中的一種或多種，優選選自膽固醇、二油酰脂酰乙醇胺、卵磷脂或3β-[N-(N’，N’-二甲基胺乙基)胺基甲酰基]膽固醇，及其組合。?

本發明中所述的聚乙烯亞胺衍生物可溶于極性有機溶劑如氯仿、二氯甲烷、乙醇等，以及水中，其重均分子量在大約1000-1,000,000道爾頓之間。其優選選自聚乙烯亞胺基三(十二烷基)氯化銨、聚乙烯亞胺基三(十六烷基)氯化銨、聚乙烯亞胺基三(十八烷基)氯化銨、聚乙烯亞胺基-油酸，及其組合。?

本發明所述的聚乙烯亞胺脂質復合納米載體可以通過聚乙烯亞胺衍生物與脂質成分的復合來制備含聚乙烯亞胺和脂質成分的納米顆粒。在本發明的一個實施方案中，上述制得到納米顆粒可以利用聚乙烯亞胺表面的-NH₂或脂質成分如1，2二硬酯酸-3磷脂酰乙醇胺(DSPE)-PEG所含的功能化基團羧基、氨基等與蛋白或抗體進行偶聯，以制備表面修飾的聚乙烯亞胺脂質復合納米載體。?

本發明中所述的聚乙烯亞胺脂質復合納米載體的制備方法包括但不限于乳化蒸發法，薄膜分散法、逆向蒸發法、復乳法、離心法等。?

其中乳化蒸發法的步驟包括：將聚乙烯亞胺衍生物和脂質成分共溶于極性有機溶劑中混勻作為有機相，得到的混合物中聚乙烯亞胺衍生物質量濃度約1％-100％，脂質成分的質量濃度約0.1％-60％；水相為含質量濃度約0.1％-20％吐溫-80的0.9％的生理鹽水或pH在大約6-9之間的緩沖液；將上述得到的水相與有機相混合，水相和有機相的體積比為約1∶6-6∶1，進行超聲乳化，然后旋轉蒸發除去所述極性有機溶劑。?

其中薄膜分散法的步驟包括：將殼聚糖長鏈烷基季銨鹽(最終質量濃度1％-100％)和脂質成分(最終質量濃度0.1％-60％)共溶于有機溶劑如氯仿中，混勻作為有機相；除去有機溶劑使成薄膜，然后加入水相通過振蕩使脂質膜水化，其中使用的水相為0.9％的生理鹽水或pH約為6-9的緩沖溶液。?

本發明中所述的脂質成分包含構成普通脂質體和陽離子脂質體的脂類，如選自膽固醇、卵磷脂、二油酰脂酰乙醇胺(DOPE)、3β-[N-(N’，N’-二甲基胺乙基)胺基甲酰基]膽固醇(DC-Chol)、二硬脂酰磷脂酰膽堿、棕櫚酰油酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰油酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺或棕櫚酰油酰磷脂酰乙醇胺，及其組合。?

本發明所述的聚乙烯亞胺脂質復合納米載體可以包載有藥物以制備聚乙烯亞胺脂質復合納米基因藥物。?