[發明專利]一種腺苷脫氨酶檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201210261265.8
• 申請日: 2012-07-26
• 公開（公告）號: CN102747133A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發明（設計）人: 張雷
• 申請（專利權）人: 北京恩濟和生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/34
• 分類號: C12Q1/34;C12Q1/28;C12Q1/26
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，具體地說涉及一種檢測人腺苷脫氨酶的檢測試劑盒。

背景技術

腺苷脫氨酶（ADA）是嘌呤核苷分解代謝過程中關鍵作用的酶，它能催化腺嘌呤核苷降解為次黃嘌呤核苷，而后經核苷磷酸化酶催化成次黃嘌呤，最終氧化成代謝產物尿酸。腺苷脫氨酶有三種同工酶，分別是腺苷脫氨酶1、腺苷脫氨酶1+cp及腺苷脫氨酶2。

腺苷脫氨酶在動物體內的分布以盲腸、小腸粘膜和脾中含量最高，在纖維細胞、羊水細胞、肝、腎、肺、骨骼肌等處也有發現，血液中ADA主要存在于血細胞中，如紅細胞、淋巴細胞和粒細胞，其活性約為血清中的40～70倍，組織中的腺苷脫氨酶活性在冰凍條件下可保持一周，在組織勻漿中可低溫保存數月之久。

腺苷脫氨酶活性是反映肝損傷的敏感指標。慢性肝炎、肝硬化和肝細胞癌患者血清腺苷脫氨酶活性顯著升高。其陽性率達85%～90%，故腺苷脫氨酶活性測定可作為慢性肝病的篩選指標。失代償期肝硬化腺苷脫氨酶活性明顯高于代償期肝硬化，因而可判斷慢性肝病的程度。另外，慢性活動性肝炎腺苷脫氨酶活性明顯高于慢性遷延性肝炎，故可用于二者的鑒別診斷。

ADA檢測方法經過多次改進，形成了目前市場上ADA檢測試劑盒的兩種主要檢測方法，包括連續檢測法和酶偶聯法。

最早的ADA檢測原理是ADA將腺苷脫氨產生次黃苷和氨。低的底物濃度達不到底物飽和要求，造成ADA活性檢測失真。因此，該法不適用于臨床應用。隨后發展的第二代ADA檢測原理為腺苷脫氨酶催化腺嘌呤核苷水解，產生次黃嘌呤核苷和氨。此方法所需試劑易配制，儀器簡單，但靈敏度低，易受外源性NH3影響，空白過高，不能直接測定紅細胞ADA活性。

同樣原因，ADA偶聯谷氨酸脫氫酶反應:?通過測量340nm處NADPH吸光度下降的速度來測算ADA活性。該法也因血清含氨干擾，以及測試系統中過高NADPH造成非特異性氧化而無成算。

發明內容

本發明的目的是提供一種檢測人腺苷脫氨酶（ADA）的檢測試劑盒。該試劑盒結果準確性強、試劑穩定性好、使用方便、便于大規模推廣。

本發明的另一目的是提供上述檢測試劑盒的生產制備及使用方法。

為實現上述目的，本發明提供的試劑盒組成為：

1.甘氨酸緩沖液、2.顯色劑、3.嘌呤核苷磷酸化酶、4.黃嘌呤氧化酶、5.過氧化物酶、6.腺嘌呤核苷、7.4-氨基安替比林溶液。。

本發明提供的上述試劑盒的制備方法及操做步驟如下：

（a）按下列比例配制好試劑：

甘氨酸緩沖液????????????????80mmol/L

顯色劑??????????????????????10mmol/L

嘌呤核苷磷酸化酶???????????0.5-1KU/L

黃嘌呤氧化酶???????????????0.8-1KU/L

過氧化物酶??????????????????0.6-1KU/L

腺嘌呤核苷??????????????????30mmol/L

4-氨基安替比林溶液?????????10mmol/L

（b）將試劑與待測樣本按一定比例混合，使其完全反應；

（c）用半/全自動生化分析儀測定吸光度變化值；

（d）根據吸光度變化值計算出樣本中腺苷脫氨酶的濃度。

本發明試劑盒的獨特性在于，顯色劑為含有3-甲基-N，N-二丙磺酸鈉苯胺的磷酸鹽緩沖液，4-氨基安替比林溶液為含有4-氨基安替比林的氯仿溶液。經過一系列反應后，可形成醌類化合物，具有顯色效果好、反應迅速、穩定的有點。

具體實施方式

下述實施例是為了更詳細的解釋本發明，但不應理解為本發明局限于此。

實施例1：

本發明的試劑盒舉例可以是雙試劑，其中：

試劑1：

甘氨酸緩沖液????????????????80mmol/L

顯色劑???????????????????????10mmol/L

嘌呤核苷磷酸化酶?????????????0.5KU/L

黃嘌呤氧化酶?????????????????0.8KU/L

過氧化物酶???????????????????0.6KU/L

試劑2：

腺嘌呤核苷???????????????????30mmol/L

4-氨基安替比林溶液???????????10mmol/L

其中：