[發明專利]一種Y染色體微缺失檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201210260960.2
• 申請日: 2012-07-26
• 公開（公告）號: CN102796819A
• 公開（公告）日: 2012-11-28
• 發明（設計）人: 宋坤;徐建成;王淑一;孫翠蓮
• 申請（專利權）人: 南昌艾迪康臨床檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 黎雙華

1.一種Y染色體微缺失檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：

(i)PCR擴增反應試劑；

(ii)擴增Y染色體AZFa區域SY84序列的引物SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2；其堿基序列為：SEQ?ID?NO.1：TCAGCAAAGAGAAGGGTCT，SEQ?ID?NO.2：TGAAGCCTACTACCTGGAGGCT；

擴增Y染色體AZFa區域SY86序列的引物SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.4；其堿基序列為：SEQ?ID?NO.3：CTCAGCACATGGGTGACACACAGA，SEQ?ID?NO.4：CACAGACACACACAGAGGGACAA；

擴增Y染色體AZFb區域SY127序列的引物SEQ?ID?NO.5和SEQ?ID?NO.6；其堿基序列為：SEQ?ID?NO.5：ATAGAGGCTAGGCTCACAA，SEQ?ID?NO.6：TAATCAAGCTGCAGGCAG；

擴增Y染色體AZFb區域SY134序列的引物SEQ?ID?NO.7和SEQ?ID?NO.8；其堿基序列為：SEQ?ID?NO.7：TACAAAACTGTCTGCCTCACC，SEQ?ID?NO.8：CTGTTATAACAACCACTGCCAA；

擴增Y染色體AZFc區域SY254序列的引物SEQ?ID?NO.9和SEQ?ID?NO.10；其堿基序列為：SEQ?ID?NO.9：AGGCTGGGTGTTACCAGAAG，SEQ?ID?NO.10：TCACTTCTTTCACTGAACCGT；

擴增Y染色體AZFc區域SY255序列的引物SEQ?ID?NO.11和SEQ?ID?NO.12；其堿基序列為：SEQ?ID?NO.11：TGAACGTGCTGAGTTAC，SEQ?ID?NO.12：AGTTATGTGCTCGTCATG；

擴增SRY基因的引物SEQ?ID?NO.13和SEQ?ID?NO.14，其堿基序列為SEQ?ID?NO.13：GTGCAAGAGAATATTCCCG，SEQ?ID?NO.14：CCTAGCTGGTGCTCCATTC。

2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括dNTP、10*PCR緩沖液、Mg²⁺、高效Tag酶。

3.如權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，Mg²⁺反應終濃度為1.25mM；dNTP反應終濃度為2.5mM。

4.如權利要求1-3之一所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的使用方法包括如下步驟：

(i)采集待測血液樣本，提取DNA；

(ii)以該DNA為模板，用權利要求1所述引物SEQ?ID?NO.1~12進行TD-PCR擴增，得到PCR反應產物；

(ⅲ)瓊脂糖凝膠電泳分析結果。

5.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，步驟(ii)的PCR反應按以下條件進行擴增：

6.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于擴增分為兩管完成，第一管包含8條引物，分別為SEQ?ID?NO.1、2、7、8、11、12、13、14；第二管包含8條引物，分別為SEQ?ID?NO.3、4、5、6、9、10、13、14。

7.如權利要求6所述試劑盒，其特征在于第一管引物濃度分別為：擴增SY84序列的引物為2uM、擴增SY134序列的引物為4uM、擴增SY255序列的引物為2uM、擴增SRY序列的引物為2uM。第二管引物濃度分別為：擴增SY86序列的引物為4uM、擴增SY127序列的引物為4uM、擴增SY254序列的引物為0.5uM、擴增SRY序列的引物為0.5uM。