[發明專利]一種快速的硫酸依替米星中控檢測方法

有效

• 申請號: 201210258929.5
• 申請日: 2012-07-25
• 公開（公告）號: CN102798674A
• 公開（公告）日: 2012-11-28
• 發明（設計）人: 楊春艷;鄒濟高;石杰;陸丹
• 申請（專利權）人: 無錫濟民可信山禾藥業股份有限公司;江西濟民可信金水寶制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所 11130
• 代理人: 王為

技術領域

本發明涉及一種硫酸依替米星生產過程中間控制的快速檢測方法，具體涉及一種以耐受壓力不低于600bar的液相色譜儀器與蒸發光檢測器聯用技術快速測定硫酸依替米星生產過程中的中間產品，達到對硫酸依替米星生產過程控制的目的。

背景技術

超高效液相色譜（UPLC）技術是隨著waters公司2003年推出的采用小顆粒填料高壓下運行的色譜儀Acquity?UPLC而興起的新的色譜分離技術。相較于高效液相色譜（HPLC）技術，它具有更高的柱效、更快的分離速度等優點，從而使分析技術跨入到高效、高通量時代。超高效液相色譜技術，采用亞2μm粒徑的填料的色譜柱，精確梯度控制的超高壓液相色譜泵，低擴散、低交叉污染的自動進樣器及高速檢測器，使UPLC的峰容量、分析效率、靈敏度都得到很大提高。

蒸發光散射檢測（ELSD）技術興起于上世紀80年代，是一種通用型檢測器，不僅彌補了紫外檢測器不能檢測無紫外吸收或只有紫外末端吸收物質的缺陷，而且相較于用于無紫外吸收物質檢測的示差折光檢測器，它具有高靈敏度、不受溫度等實驗條件影響、可用于梯度洗脫等優點。ELSD由霧化器、加熱漂移管、光散射池和散射光檢測器組成，其工作原理主要包括霧化、蒸發、光散射及檢測等3個過程。

硫酸依替米星(Etimicin?sulfate)，結構式如下：

硫酸依替米星是我國科研人員自行研制的，擁有自主知識產權的高效、低毒、抗耐藥菌的新一代半合成氨基糖苷類抗生素，是唯一獲得國家一類新藥證書的抗感染藥物。本品適用于對其敏感的大腸埃希桿菌、克雷伯氏肺炎桿菌、沙雷氏桿菌屬、枸橡酸桿菌、腸桿菌屬、不動桿菌屬、變形桿菌屬、流感嗜血桿菌、銅綠假單胞菌和葡萄球菌等引起的各種感染。臨床研究顯示本品對以下感染有較好的療效:呼吸道感染:如急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發作、社區肺部感染等。腎臟和泌尿生殖系統感染:如急性腎盂腎炎、膀胱炎、慢性腎盂腎炎或慢性膀胱炎急性發作等。皮膚軟組織和其它感染:如皮膚及軟組織感染、外傷、創傷和手術產后的感染及其他敏感菌感染。同時具有較低的耳、腎毒性不良反應發生率，證明了硫酸依替米星是臨床應用中高效、安全的新一代半合成氨基糖苷類抗生素。硫酸依替米星由于無紫外生色基團，因此只具有很弱的紫外末端吸收，不能用紫外-可見光檢測器直接測定，故本方法采用通用型檢測器蒸發光散射檢測技術。硫酸依替米星生產過程需要進行中控檢測，目的是檢測依替米星在分離純化中的洗脫流分中依替米星含量，以監測硫酸依替米星的分離純化過程，獲得純度較高的依替米星終產品。

中控檢測是針對硫酸依替米星制備過程中的分離純化過程的不同濃度乙醇解吸液，分離純化后的含乙醇的依替米星解吸液的制備方法如下：取原料車間不同時間段收集的中間產品依替米星解吸液，以0.22μm濾膜過濾，即得。目前硫酸依替米星生產過程中控檢測方法為柱前衍生化高效液相色譜法，由于衍生化反應復雜不可控、衍生化產物的不穩定性影響測定結果的準確性，同時檢測時間至少要半個小時以上，嚴重影響了硫酸依替米星的生產效率。因此發明一種快速、準確的中控檢測方法，對硫酸依替米星的生產和工藝開發都有非常積極的意義。

正是由于超高效液相色譜技術以及蒸發光散射技術滿足我們對于硫酸依替米星測定要求，我們開發了硫酸依替米星UPLC-ELSD分析方法。

發明內容

本發明的目的是研究開發一種快速測定硫酸依替米星生產過程中分離純化工序中的中控檢測方法。

本發明的具體技術方案如下：

本發明提供一種硫酸依替米星檢測方法，該方法采用超高效液相色譜法，同時使用蒸發光散射檢測器實現快速檢測。

本發明的檢測方法，所用的色譜條件如下：

1、液相色譜儀耐受壓力不低于600bar，儀器型號包括但不限于Waters?H-Class或Agilent?1260或Agilnet?1290。

2、色譜柱填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠，粒徑1.7~3.5μm，柱規格為50mm～150mm×1.0~4.6mm，柱孔徑為80-120A°。

3、流動相分為有機相和水相，有機相為甲醇或乙腈，水相為水-氨水-冰醋酸混合溶液體積比范圍為（88~98）:（1~5）：（0.1~1）。有機相與水相的體積比按時間順序從20:80變化到90:10。

4、流動相流速為0.5~2ml/min，進樣量為1μl~10μl。

5、檢測器為蒸發光散射檢測器，參數為漂移管溫度為45~70℃，氮氣流速1.5~3.0L/min，Gain值1~7。

本發明的檢測方法，步驟如下：