[發明專利]丙戊酸免疫原及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201210258576.9
• 申請日: 2012-07-25
• 公開（公告）號: CN103242445A
• 公開（公告）日: 2013-08-14
• 發明（設計）人: 虞留明;田軍;蔡江麗
• 申請（專利權）人: 蘇州博源醫療科技有限公司
• 主分類號: C07K14/795
• 分類號: C07K14/795;C07K14/765;C07K14/47;C07K1/113;C07K16/44;G01N33/53
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 曹毅

技術領域

本發明涉及藥物制劑，具體涉及的是丙戊酸免疫原及其制備方法和應用。

背景技術

丙戊酸，其結構式如下：

丙戊酸是一種廣譜性抗癲癇藥物，由于其療效顯著、安全性好等優點，臨床主要用于治療全身性或部分性類型的癲癇發作，包括各種癲癇、躁郁癥和少見的重性抑郁障礙。在丙戊酸的臨床給藥治療過程中，由于患者個體藥物代謝動力學差異，造成丙戊酸的給藥量與血藥濃度之間的相關性較差，同時由于丙戊酸的有效治療窗窄，臨床血藥濃度的參考范圍為50-100?μg/ml，而在高于參考范圍的血藥濃度時會出現中樞神經系統抑制、呼吸不足、心動過速、低血壓和肝毒性等毒副作用，嚴重時會導致昏迷，而低于有效的濃度時又達不到相關療效。因此在治療期間對病人的血液藥物水平進行監測非常重要。

????現有的丙戊酸藥物濃度監測的方法主要有熒光偏振法、微粒子化學發光法和比濁法。高度自動化的熒光偏振法和微粒子化學發光法因其簡便快速的優點成為臨床丙戊酸血藥濃度監測最常用的方法，但其試劑盒全部依賴進口，價格昂貴和有效期較短是其不可回避的缺點，造成臨床使用難以普及。

發明內容

為解決上述問題，本發明提出了一種新型的丙戊酸免疫原及其制備方法和應用，研制出一種含有丙戊酸特異性抗體和酶標偶聯物的免疫檢驗試劑。

為達到上述技術目的，實現上述技術效果，本發明通過以下技術方案實現：

丙戊酸免疫原，有式（Ⅰ）的結構式：

式（Ⅰ）

其中：

????R為連接基團，是-(CH₂)_n-COO^-?、O-(CH₂)_n-COO^-、-S-(CH₂)_n-COO^-、-NH-(CH2)_n-COO^-中的一種，所述n為1至20之間的整數；優選地，R為-(CH₂)_n-COO^-?,?n為1至20之間的整數；更為優選地，所述R為-(CH₂)₄-COO^-?；

????載體為具有免疫原性的蛋白質，最常用的免疫原性載體包括牛血清白蛋白，血藍蛋白（KLH）和甲狀腺球蛋白等。

進一步的，丙戊酸免疫原的制備方法，包括以下步驟：

步驟1）制備具有式（Ⅱ）中結構的丙戊酸衍生物；

式（Ⅱ）

步驟2）將具有免疫原性的載體溶解成具有免疫原性的載體溶液；

?步驟3）將具有式（Ⅱ）中結構的丙戊酸衍生物加入到所述具有免疫原性的載體溶液中，使具有式（Ⅱ）中結構的丙戊酸衍生物中連接基團所在部分和具有免疫原性的載體發生縮聚反應，形成丙戊酸免疫原。

進一步的，當所述R為-(CH₂)₄-COO^-時，丙戊酸免疫原的制備方法，包括以下步驟：

（1）、合成具有式（Ⅱ）結構的丙戊酸衍生物

1、制備化合物2：

用有機溶劑A溶解1-10?g經正己烷洗滌的NaH，形成溶液1；用有機溶劑A溶解5-30?g的丙戊酸，形成溶液2，將溶液2全部逐滴加入溶液1中進行混合。其中有機溶劑A的使用量根據需要在100-300?mL左右。經通入惰性氣體反應后，加入1-10?g的二異丙胺、0.1-1.0g的丁基鋰和5-20?g的6-溴-1-己烯，待反應完成后經減壓濃縮、萃取、過濾、干燥和抽真空濃縮得到化合物2，即如下結構式（Ⅳ）中的化合物。??????????????????????

?????????????????????????式（Ⅳ）

利用丙戊酸制備化合物2的化學反應式如下：

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2、制備丙戊酸衍生物粗提物

用有機溶劑B溶解5-20?g的化合物2，1-10?g?NaHCO₃，經冰浴至0℃反應一定時間后得到溶液3，有機溶劑B的使用量根據需要在50-100?mL左右。先后分別向反應溶液中加入20-40?g高錳酸鉀和20-40?g亞硫酸氫鈉，冰浴至0℃反應一段時間后，經過濾、減壓濃縮、萃取、洗滌、干燥等步驟得到具有式（Ⅱ）中結構的丙戊酸衍生物粗提物。