[發(fā)明專利]編碼殺蟲(chóng)蛋白的核苷酸序列

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210257577.1
• 申請(qǐng)日: 2006-08-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102766652A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-11-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: N·N·博達(dá)諾瓦;D·R·科爾賓;T·M·馬爾瓦;F·J·佩爾拉克;J·K·羅伯茨;C·P·羅馬諾
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 孟山都技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/82
• 分類號(hào): C12N15/82;A01H5/00;A01G1/00;A01G13/00
• 代理公司: 中國(guó)專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李波;萬(wàn)雪松

本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2006年8月30目的中國(guó)專利申請(qǐng)200680031606.5“編碼殺蟲(chóng)蛋白的核苷酸序列”的分案申請(qǐng)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明提供用于植物的新編碼序列。該編碼序列編碼針對(duì)廣泛鱗翅目物種作物害蟲(chóng)毒性的嵌合殺蟲(chóng)蛋白。

背景技術(shù)

天然存在的蘇云金芽孢桿菌(B.thuringiensis)分離物的商業(yè)制劑已長(zhǎng)久用于對(duì)農(nóng)業(yè)昆蟲(chóng)害蟲(chóng)的生物控制。根據(jù)常規(guī)農(nóng)業(yè)實(shí)踐將從蘇云金芽孢桿菌物種發(fā)酵獲得的Bt孢子和晶體濃縮并配制用于葉施用。

已知Cry1晶體蛋白家族成員表現(xiàn)出對(duì)抗鱗翅目昆蟲(chóng)幼蟲(chóng)的生物活性，并可用作控制鱗翅目昆蟲(chóng)害蟲(chóng)的試劑。Cry1δ-內(nèi)毒素的前體形式由兩個(gè)約相同大小的部分組成。前體蛋白的羧基末端部分或毒素原部分穩(wěn)定晶體形成，且不表現(xiàn)殺蟲(chóng)活性。前體蛋白氨基末端這一半含有Cry1蛋白的毒素部分，且基于Cry1家族成員中保守或基本保守序列的比對(duì)，其可進(jìn)一步再分為三個(gè)結(jié)構(gòu)域。這三個(gè)亞結(jié)構(gòu)域以Cry1A?δ-內(nèi)毒素的三維晶體學(xué)結(jié)構(gòu)模型為基礎(chǔ)，其中如從蛋白毒素部分氨基末端所測(cè)量的，三個(gè)亞結(jié)構(gòu)域分別稱作結(jié)構(gòu)域I、結(jié)構(gòu)域II和結(jié)構(gòu)域III。結(jié)構(gòu)域I含有活性毒素部分的大約第一個(gè)三分之一，且已顯示對(duì)于通道形成是關(guān)鍵的(Thompson等人，1995)。結(jié)構(gòu)域II和III各含活性毒素部分的大約中部和羧基末端部分。依賴于所檢查的昆蟲(chóng)和δ-內(nèi)毒素，結(jié)構(gòu)域II和III均與受體結(jié)合和昆蟲(chóng)物種特異性牽連(Thompson等人，1995)。

從本領(lǐng)域中已知的眾多天然殺蟲(chóng)晶體蛋白結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)重配而任意產(chǎn)生性質(zhì)增強(qiáng)的嵌合蛋白的可能性是渺茫的。這是蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)、折疊、寡聚化和活化的復(fù)雜本質(zhì)的結(jié)果，所述活化包括對(duì)嵌合前體(如果以這種形式表達(dá)的話)的正確蛋白酶解加工以釋放殺蟲(chóng)毒素部分。只有通過(guò)各親本蛋白內(nèi)針對(duì)包括入嵌合結(jié)構(gòu)的具體靶區(qū)作出仔細(xì)的選擇才能構(gòu)建出與嵌合體所來(lái)源的親本蛋白相比表現(xiàn)有改進(jìn)的殺蟲(chóng)活性的功能性殺蟲(chóng)毒素。經(jīng)驗(yàn)已顯示，毒素結(jié)構(gòu)域的重裝配，即由任意兩個(gè)或更多個(gè)彼此不同的毒素的結(jié)構(gòu)域I、II和III組成的嵌合毒素的裝配，導(dǎo)致構(gòu)建出晶體形成有缺陷和/或完全缺乏針對(duì)優(yōu)選靶昆蟲(chóng)害蟲(chóng)物種的任何可檢測(cè)的殺蟲(chóng)活性的蛋白。在某些情況下，嵌合毒素將表現(xiàn)出良好的晶體形成特性，但仍不表現(xiàn)可檢測(cè)的殺蟲(chóng)活性。只有通過(guò)嘗試與錯(cuò)誤才能配制有效的殺蟲(chóng)嵌合體，且盡管那樣，本領(lǐng)域技術(shù)人員仍不必定最后得到表現(xiàn)與該嵌合體組分所來(lái)源的任何單個(gè)親本毒素蛋白相比相同或改進(jìn)的殺蟲(chóng)活性的嵌合體。

文獻(xiàn)報(bào)道了從兩個(gè)或更多個(gè)Bt殺蟲(chóng)晶體蛋白前體構(gòu)建或裝配嵌合蛋白的例子，但是并非全部都表現(xiàn)與嵌合體所來(lái)源的前體蛋白相比等同或改進(jìn)的殺蟲(chóng)或晶體形成特性(Bosch等人(WO95/06730)；Thompson等人(WO95/30753)；Thompson等人(WO95/30752)；Malvar等人(WO98/22595)；Gilroy等人(美國(guó)專利號(hào)5,128,130)；Gilroy(美國(guó)專利號(hào)5,055,294)；Lee等人(1992)Gene?267：3115-3121；Honee等人(1991)Mol.Microbiol.5：2799-2806；Schnepf等人(1990)J.Biol.Chem.265：20923-20930；Perlak等人(1990)Bio/Technol.8：939-9943；Perlak等人(1993)Plant?Mol.Biol.22：313-321)。