[發明專利]抑制細胞周期進程的化合物在制備抑制或去除腫瘤細胞中雙微體藥物中的應用

無效

• 申請號: 201210257495.7
• 申請日: 2012-07-24
• 公開（公告）號: CN102755345A
• 公開（公告）日: 2012-10-31
• 發明（設計）人: 傅松濱;于旸;孫文靖;于丹紅;孟祥寧;金焰;陳峰;孫冬琳
• 申請（專利權）人: 哈爾濱醫科大學
• 主分類號: A61K31/7068
• 分類號: A61K31/7068;A61K31/4745;A61K31/4375;A61K31/337;A61P35/00
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;費碧華

技術領域

本發明涉及一類抑制細胞周期進程的化合物在制備抑制或去除腫瘤細胞中雙微體藥物中的應用。通過去除腫瘤細胞中雙微體數目、減少雙微體攜帶癌基因擴增而有效降低含有雙微體的惡性腫瘤細胞的惡性程度。本發明屬于腫瘤生物治療技術領域。?

背景技術

雙微體（double?minutes或double?minute?chromosomes，DMs）是只存在于腫瘤細胞和耐藥細胞中的基因擴增的主要細胞遺傳學標志，為細胞中位于染色體外、小的、成對存在的無中心粒的染色質小體，是染色體外遺傳單位的一種主要存在形式。?

1962年首次在一些惡性腫瘤細胞和滲出液及肺癌胸水的轉移細胞中發現這種染色體外的微體。目前已在白血病、惡性淋巴瘤等多種血液系統腫瘤，和肺癌、結腸癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌及兒童神經母細胞瘤等實體性腫瘤中都可檢測到雙微體，雙微體是惡性腫瘤基因擴增的主要的細胞遺傳學標記。不同類型的腫瘤細胞中雙微體具有較高的異質性，攜帶癌基因和多藥耐藥性基因擴增使細胞具有選擇優勢，這些基因的擴增是導致癌癥發生，發展，及癌細胞產生耐藥的重要元素。減少或去除細胞內的雙微體，從而減少癌基因和耐藥基因的擴增及其蛋白的功能，是一種有效的減少癌細胞惡性的方法。?

從腫瘤細胞中消除雙微體上擴增的癌基因和耐藥基因，能夠降低其致癌性或恢復細胞對藥物的敏感性，因此，去除雙微體是治療以基因擴增為標志的疾病的可行途徑。目前羥基脲應用于腫瘤治療，但對腫瘤并沒有較強的特異性，羥基脲半衰期短，高劑量，易產生快速耐受性。?

針對腫瘤的特點進行特異性治療可以提高腫瘤治療的敏感性和特異性，有的放矢，我們針對腫瘤細胞最基本特征，即增殖能力強這一特點對腫瘤細胞的細胞周期進行干預，預通過減少腫瘤細胞中雙微體數目和攜帶癌基因和耐藥基因擴增，從而?控制腫瘤細胞的惡性程度，針對腫瘤細胞中雙微體的靶向性治療將會成為一種新的腫瘤治療策略。?

發明內容

本發明的目的在于，針對目前腫瘤治療的效果欠佳，從而提供一種針對含有雙微體的腫瘤的靶向生物治療策略，通過選擇抑制細胞周期進程的化合物去除細胞中雙微體數目和攜帶基因擴增而降低含有雙微體的腫瘤細胞的惡性程度。?

本發明針對含有雙微體的腫瘤細胞，選擇抑制細胞周期進程的化合物吉西他濱、喜樹堿、苦參堿和紫杉醇低濃度作用，其劑量低于對照組羥基脲上千倍，發現吉西他濱、喜樹堿、苦參堿和紫杉醇可通過去除細胞中的雙微體數目和減少攜帶癌基因擴增，而有效降低含有雙微體的腫瘤細胞的惡性程度。?

因此，本發明提出了抑制細胞周期進程的化合物在制備抑制或去除腫瘤細胞中雙微體藥物中的應用，其特征在于所述的化合物為吉西他濱、喜樹堿、苦參堿或紫杉醇其中至少一種或其組合。?

在本發明的一個具體實施例中，所述的腫瘤細胞為卵巢癌細胞。?

為了達到以上目的，本發明采用的技術方案為：?

1、檢測腫瘤細胞的細胞遺傳學特征?

選擇含有雙微體的人卵巢癌細胞系UACC-1598為研究對象。?

（1）常規細胞培養；?

（2）細胞中期核型標本制備以及檢測細胞株含有雙微體的信息。?

2、細胞周期進程抑制劑對細胞中雙微體的影響?

選用低濃度各種細胞周期進程抑制劑持續作用此種細胞，優化條件，檢測細胞中雙微體的變化。?

選用4種與細胞周期進程相關的抑制劑：①吉西他濱，核糖核苷酸還原酶抑制劑，作用于細胞周期DNA合成期（購自法國禮來公司）；②10-羥基喜樹堿，選擇性抑制DNA拓撲異構酶I(TopoI)（購自上海龍翔生物醫藥開發有限公司）；③苦參堿，阻滯細胞在G0/G1期，抑制DNA拓撲異構酶II（TOPO?II)（購自中國蕪湖甙爾塔醫藥科技有限公司）；④紫杉醇，微管穩定劑，抑制細胞有絲分裂，停止在細胞周期G2期和M期（購自上海龍翔生物醫藥開發有限公司）。以已知有作用的羥基脲（購自上海龍翔生物醫藥開發有限公司）作為陽性對照。?

（1）雙微體數目檢測?

抑制劑作用后，按照常規方法進行中期核型制備，計數50-100個核型中的雙微體數目。?

（2）雙微體攜帶基因擴增水平檢測?

已知人卵巢癌細胞UACC-1598細胞中雙微體上攜帶EIF5A2和MYCN基因擴增，通過實時定量PCR（qPCR）方法檢測抑制劑作用下EIF5A2和MYCN基因的擴增水平。?

3、細胞周期進程抑制劑對細胞生物學行為的影響?

（1）繪制細胞生長曲線檢測加入抑制劑作用后的細胞增殖能力變化；?