[發明專利]一種縮宮素的固相合成方法

有效

• 申請號: 201210256922.X
• 申請日: 2012-07-23
• 公開（公告）號: CN102850441A
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發明（設計）人: 楊毅躍;姚程成;康國偉;蒙相峰;魯堯
• 申請（專利權）人: 無錫市凱利藥業有限公司
• 主分類號: C07K7/16
• 分類號: C07K7/16;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙) 11411
• 代理人: 曾少麗

1.一種縮宮素的固相合成方法，包括以下步驟：

(Ⅰ)以AM?Resin和Rink?Amide?Linker為原料，制備Rink?Amide?AM?Resin；

(Ⅱ)在步驟(Ⅰ)制得的Rink?Amide?AM?Resin上通過固相合成法依次偶聯含Fmoc-氨基酸，脫保護基，裂解得線性縮宮素；

(Ⅲ)將上述線性縮宮素氧化，純化，冷凍干燥得縮宮素。

2.根據權利要求1所述的一種縮宮素的固相合成方法，其特征在于，所述步驟(Ⅰ)在N,N'-二異丙基碳二亞胺DIC+1-羥基苯并三唑HOBT+4-二甲氨基吡啶DMAP或N,N'-二異丙基碳二亞胺DIC+1-羥基苯并三唑HOBT作用下進行反應，其中AM?Resin替代度為0.4~1.0mmol/g。

3.根據權利要求1或2所述的一種縮宮素的固相合成方法，其特征在于，所述步驟(Ⅱ)中的含Fmoc-氨基酸為：Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH和Boc-Cys(Trt)-OH；所述固相合成法使用的縮合劑為：HOBt/DIC。

4.根據權利要求3所述的一種縮宮素的固相合成方法，其特征在于，反應介質均為無水N,N-二甲基甲酰胺DMF；脫Fmoc使用的試劑為：20%~25%的哌啶/二氯甲烷DCM或哌啶/N,N-二甲基甲酰胺DMF；脫保護基為脫側鏈保護基和叔丁氧羰基，其中Boc脫側鏈保護基、叔丁氧羰基Boc和裂解的試劑均為：三氟乙酸TFA/三異丙基硅烷TIS/苯酚PhOH/3-巰基丙酸MPA/H₂O；氨基酸活化、偶聯、脫保護、氧化環化溫度均為0~30℃。

5.根據權利要求4所述的一種縮宮素的固相合成方法，其特征在于，使用的洗滌劑依次為DMF、MeOH、DCM、DMF。

6.根據權利要求1所述的一種縮宮素的固相合成方法，其特征在于，所述步驟(Ⅲ)氧化使用的氧化劑為空氣或H₂O₂，堿中和劑為NH₃水，酸中和劑為HAC。

7.根據權利要求5所述的一種縮宮素的固相合成方法，其特征在于，氧化劑在反應物濃度為10^-3~10^-4mol/L，氧化溫度為20~30℃。