[發明專利]IgG1型抗人β2糖蛋白I單克隆抗體及其制備和應用

無效

• 申請號: 201210256004.7
• 申請日: 2012-07-23
• 公開（公告）號: CN102816238A
• 公開（公告）日: 2012-12-12
• 發明（設計）人: 周紅;許國瑩;胥亞;嚴金川;穆原;王婷;夏龍飛;解鴻翔;劉敬敬;張曉蕾
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/543;C12R1/91
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

技術領域

本發明屬于抗體制備技術范疇，用于相關自身免疫性疾病的研究領域，具體涉及抗人β₂糖蛋白I（β₂GPI）單克隆抗體的制備、鑒定及應用。?

背景說明?

抗磷脂綜合征（APS）是以病人體內出現高滴度抗磷脂抗體（APL）為主要特征的一種非器官特異性自身免疫性疾病，可單獨發病，也可與其他自身免疫病伴發，尤其是SLE。它的主要臨床特點是反復動、靜脈血栓形成，多器官缺血及習慣性流產。APL是一組直接針對負電荷磷脂和蛋白輔助因子的非均一性的循環性自身抗體，主要包括狼瘡抗凝物（LA）、抗心磷脂抗體（aCL）、抗磷脂酰絲氨酸抗體和抗磷脂酰乙醇胺抗體。研究發現，APL主要識別磷脂結合蛋白，而不是磷脂本身，其中，最重要的磷脂結合蛋白是β₂糖蛋白I（β₂GPI），其與相應抗體（抗β₂GPI）形成復合物，在APS病理過程中發揮重要作用。2005年悉尼舉行的國際血栓止血學會（ISTH）會議首次增補抗β2GPI抗體陽性作為APS實驗室診斷指標之一。?

抗β₂GPI/β₂GPI復合物可通過激活血管內皮細胞，使其分泌并釋放細胞粘附分子、炎性因子、TF等，并可刺激血液單核細胞表達TF。TF為貫穿于細胞膜的單鏈糖蛋白，是凝血因子Ⅶ/VIIa的受體，TF/VIIa以復合物的形式激活凝血因子Ⅸ、Ⅹ，從而引發血液凝固。因此，抗β₂GPI/β₂GPI復合物誘導細胞表達TF是APS血栓形成的重要機理，但具體的作用機制還亟待探討。本實驗室主要從事β₂GPI及其抗體刺激單核細胞的胞內信號傳導機制的研究，進而闡明抗β₂GPI/β₂GPI在APS血栓形成機制中的關鍵作用。在研究中需要使用大量β₂GPI及抗β₂GPI，但是目前國內市場上還沒有抗β₂GPI銷售，國外此抗體銷售價格過高，且購買周期長，制約研究工作的順利開展。因此，制備抗β₂GPI單克隆抗體將大大節約研究的時間成本和經濟成本，為這一領域的研究工作順利進行奠定良好基礎，具有重要的應用意義。?

國內外不同文獻報道的正常人血漿中β₂GPI的水平稍有差別：有200±35m?g/L、150~300m?g/L、50~150mgL等，文獻報道結果不一有很大的原因在于所用檢測方法不同，有的是用ELISA檢測，還有的用放射免疫法、免疫電泳等。要想得到統一的結果那么首先得統一檢測方法。目前國內還沒有檢測β₂GPI的試劑盒，因此本發明中抗β₂GPI單克隆抗體的制備為β₂GPI試劑盒的制備奠定了一定基礎，以便為國內提供了一個統一檢測β₂GPI的方法。新近有文獻報道，APS患者體內總的β₂GPI的水平明顯高于健康及其他自身免疫性疾病對照者，?且與健康對照組相比，APS患者體內β₂GPI含量升高，其血栓形成的風險也相應增加，說明β₂GPI的水平與血栓形成的風險有很大的相關性。據還有些文獻報道，β₂GPI與許多疾病存在一定的關系，不同疾病β₂GPI可表現出不同變化，如在肝硬化患者和彌漫性血管內凝血患者體內β₂GPI降低，有家族聚集傾向的腦卒中患者β₂GPI血清水平的增高，但具體機制不詳。綜上，本發明所述試劑盒不僅可用于APS患者血栓形成風險的預測而且可以用于中國人群β₂GPI水平的普查以及方便研究其與其它疾病之間的關系。?