[發明專利]一對轉錄激活子樣效應因子核酸酶L3和R1及其編碼基因與應用

有效

• 申請號: 201210255915.8
• 申請日: 2012-07-21
• 公開（公告）號: CN102850444A
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發明（設計）人: 吳昭;趙金龍
• 申請（專利權）人: 上海斯丹賽生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C12N15/11;C12N9/22;C12N15/55;C12N15/63;C12N5/10;C12N15/85
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司 31227
• 代理人: 吳瑾瑜

1.一對短肽，其特征在于，所述一對短肽分別具有如SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示的氨基酸序列。

2.一對多核苷酸，其特征在于，所述一對多核苷酸分別編碼如權利要求1所述的一對短肽。

3.權利要求2所述一對多核苷酸，其特征在于，所述一對多核苷酸分別具有如SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.4所示的堿基序列。

4.一對蛋白質，其特征在于，所述一對蛋白質由權利要求1所述的一對短肽兩端分別加上轉錄激活子樣效應因子氨基酸序列框架的N端和C端組成；其中，所述的轉錄激活子樣效應因子氨基酸序列框架的N端和C端為天然的或經過人工改造的序列。

5.權利要求4所述一對蛋白質，其特征在于，所述一對蛋白質分別具有如SEQ?ID?NO.5和SEQ?ID?NO.6所示的氨基酸序列。

6.一對多核苷酸，其特征在于，所述一對多核苷酸分別編碼如權利要求4或5所述的一對蛋白質。

7.權利要求6所述一對多核苷酸，其特征在于，所述一對多核苷酸分別具有如SEQ?ID?NO.7和SEQ?ID?NO.8所示的堿基序列。

8.一對融合蛋白，其特征在于，所述一對融合蛋白為轉錄激活子樣效應因子核酸酶，由權利要求4所述的一對蛋白質分別與DNA切割蛋白融合而成。

9.權利要求8所述一對融合蛋白，其特征在于，由權利要求4所述的一對蛋白質分別與DNA切割蛋白的二個亞基融合。

10.權利要求9所述一對融合蛋白，其特征在于，所述的DNA切割蛋白為天然的或經過人工改造的Fok1?DNA內切酶。

11.權利要求8～10任一權利要求所述一對融合蛋白，其特征在于，所述一對融合蛋白分別具有如SEQ?ID?NO.9和SEQ?ID?NO.10所示的氨基酸序列。

12.一對多核苷酸，其特征在于，所述一對多核苷酸分別編碼如權利要求8～10任一權利要求所述的一對融合蛋白。

13.一對多核苷酸，其特征在于，所述一對多核苷酸分別編碼如權利要求11所述的一對融合蛋白。

14.權利要求13所述的一對多核苷酸，其特征在于，所述一對多核苷酸分別具有如SEQ?ID?NO.11和SEQ?ID?NO.12所示的堿基序列。

15.一種重組載體，其特征在于，包含權利要求2、3、6、7、13或14任一權利要求所述一對多核苷酸中的任意一條多核苷酸。

16.一種宿主細胞，其特征在于，含有權利要求15所述重組載體。

17.一種重組載體，其特征在于，包含權利要求12所述一對多核苷酸中的任意一條多核苷酸。

18.一種宿主細胞，其特征在于，含有權利要求17所述重組載體。

19.權利要求16或18所述的宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞為人離體細胞。

20.權利要求11所述一對融合蛋白在對人RHD基因或RHCE基因靶向修飾中的應用。

21.如權利要求14所述一對多核苷酸在對人RHD基因或RHCE基因靶向修飾中的應用。

22.一種人RHD基因或RHCE基因打靶的方法，其特征在于，包括：將權利要求11所述一對融合蛋白或者權利要求13或14所述一對多核苷酸或者含有權利要求13或14所述一對多核苷酸的重組載體轉入人離體細胞，于30-37℃擴增培養3-7天，得到RHD基因或RHCE基因被靶向修飾的細胞。

23.權利要求22所述的方法，其特征在于，所述人離體細胞中還轉入有抗puro蛋白或能表達抗puro蛋白的質粒。蛋白、寡核苷酸或質粒轉入細胞后并加入puro藥殺篩選成功轉入的細胞,于37℃藥殺3天，30-37℃擴增培養1-4天，得到RHD基因或RHCE基因被靶向修飾的細胞