[發(fā)明專利]一種快速簡(jiǎn)便評(píng)價(jià)平面結(jié)構(gòu)分子潛在毒性的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210254145.5
• 申請(qǐng)日: 2012-07-23
• 公開（公告）號(hào): CN102749311A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李軍生;李姹姹;楊小梅;黃國(guó)霞;閻柳娟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西工學(xué)院
• 主分類號(hào): G01N21/63
• 分類號(hào): G01N21/63
• 代理公司: 柳州市榮久專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 45113
• 代理人: 韋微

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種快速簡(jiǎn)便評(píng)價(jià)平面結(jié)構(gòu)分子潛在毒性的方法。

背景技術(shù)

Lerman在1961年證明吖啶嵌入到DNA的堿基中并首次提出DNA嵌入劑模型，平面芳香稠環(huán)結(jié)構(gòu)分子能夠作為DNA嵌入劑嵌入到DNA中。脫氧核糖核酸（DNA）作為遺傳信息載體，包含了有機(jī)生物體最豐富的信息，是許多分子作用的靶點(diǎn)。分子嵌入到DNA,DNA構(gòu)象發(fā)生變化，或者與DNA鏈共價(jià)交聯(lián)，或者切斷DNA妨礙其復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，影響基因表達(dá)，從而顯示細(xì)胞毒性。1993年,Pasternack等用普通熒光分光光度計(jì)，選擇合適的激發(fā)和發(fā)射通帶寬度，采用相等激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)同時(shí)掃描激發(fā)和發(fā)射單色器得到同步光譜（即△l=?0nm）,建立共振散射光譜技術(shù)。共振散射技術(shù)靈敏度高，操作簡(jiǎn)便，適合研究芳香族分子與DNA的相互作用關(guān)系。

許多天然和人工合成的分子具有平面結(jié)構(gòu)，在食品添加劑、醫(yī)藥、農(nóng)藥、化工領(lǐng)域具有廣泛用途，但是具有顯著的毒性。目前相關(guān)化合物潛在毒性研究十分薄弱，已有的檢測(cè)技術(shù)通常檢測(cè)操作繁瑣且時(shí)間較長(zhǎng)，例如哺乳類動(dòng)物細(xì)胞姐妹染色單體互換體外試驗(yàn)，哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞微核試驗(yàn)，體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)，自然殺傷細(xì)胞活性試驗(yàn)等，所需檢測(cè)設(shè)備復(fù)雜、操作煩瑣或所需時(shí)間較長(zhǎng)。所以需要一種快速簡(jiǎn)便的方法來評(píng)價(jià)這些具有平面結(jié)構(gòu)的分子的潛在毒性，以便規(guī)避其毒性，為具有平面結(jié)構(gòu)的分子更好的應(yīng)用在食品添加劑、醫(yī)藥、農(nóng)藥等領(lǐng)域提供指導(dǎo)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：提供一種快速簡(jiǎn)便評(píng)價(jià)平面結(jié)構(gòu)分子潛在毒性的方法，該方法引入DNA嵌入劑理論，通過共振散射光譜研究平面結(jié)構(gòu)分子與DNA相互作用關(guān)系，探索此類分子與DNA結(jié)合飽和值，構(gòu)建其潛在毒性快速簡(jiǎn)便評(píng)價(jià)方法。

解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案是：一種快速簡(jiǎn)便評(píng)價(jià)平面結(jié)構(gòu)分子潛在毒性的方法，該方法引入了DNA藥物嵌入理論，通過共振光散射技術(shù)研究平面結(jié)構(gòu)分子與DNA的相互作用關(guān)系，并根據(jù)共振散射光譜測(cè)定結(jié)果推算出相應(yīng)的平面結(jié)構(gòu)分子與DNA結(jié)合飽和值，進(jìn)一步通過平面結(jié)構(gòu)分子與DNA結(jié)合飽和值作為評(píng)價(jià)指標(biāo)評(píng)價(jià)相應(yīng)的平面結(jié)構(gòu)分子的潛在毒性大小；所述的平面結(jié)構(gòu)分子與DNA結(jié)合飽和值，用下式表示：

平面結(jié)構(gòu)分子與DNA結(jié)合飽和值越大，平面結(jié)構(gòu)分子嵌入DNA能力和潛在毒性越強(qiáng)。

首先對(duì)溴化乙錠、阿霉素、米托蒽醌三種典型DNA嵌入毒性分子進(jìn)行共振散射光譜檢測(cè)，分別得出它們與DNA結(jié)合飽和值，然后以溴化乙錠、阿霉素、米托蒽醌三種DNA嵌入毒性分子與DNA結(jié)合飽和值作為對(duì)照，快速地比較出其它類平面結(jié)構(gòu)分子的潛在毒性大小。

該方法具體包括以下步驟：

（1）取數(shù)支比色管，分別加入BR緩沖液、待評(píng)價(jià)的平面結(jié)構(gòu)分子溶液和DNA溶液，并加入水使每支比色管中的液體總體積相同，要求每支比色管中，加入的BR緩沖液的量相同，待評(píng)價(jià)的平面結(jié)構(gòu)分子濃度與DNA濃度的比值不同，其中一支比色管中加入的DNA溶液的量為零；

（2）取一支比色管，加入BR緩沖液和DNA溶液，并加入水使比色管中的液體總體積與步驟（1）比色管中的液體總體積相同，加入的BR緩沖液的量與步驟（1）中每支比色管中加入的BR緩沖液的量相同；

（3）將步驟（1）和步驟（2）中的全部比色管通過旋渦混合器消除氣泡并混勻，在35-40℃水浴中放置20-60min，于熒光分光光度計(jì)進(jìn)行同步掃描獲取共振散射光譜，發(fā)射和激發(fā)狹縫15nm，掃描范圍在220-700nm，通過共振散射光譜測(cè)定，找出共振散射信號(hào)最強(qiáng)的一條共振散射線對(duì)應(yīng)的比色管，此時(shí)的DNA濃度就是該平面結(jié)構(gòu)分子與DNA結(jié)合飽和濃度，推算出待評(píng)價(jià)的平面結(jié)構(gòu)分子與DNA結(jié)合飽和值，以平面結(jié)構(gòu)分子與DNA結(jié)合飽和值作為評(píng)價(jià)指標(biāo)評(píng)價(jià)相應(yīng)的平面結(jié)構(gòu)分子的潛在毒性大小。

本發(fā)明的進(jìn)一步技術(shù)方案是：該方法具體包括以下步驟：

（1）取6-20支10?mL的比色管，分別加入BR緩沖液1mL，然后分別加入濃度相同的待評(píng)價(jià)的平面結(jié)構(gòu)分子溶液0.1mL，再分別加入濃度相同的DNA溶液0-1.5mL，每支比色管中加入的DNA溶液的量不同，其中一支比色管中加入的DNA溶液的量為0，最后加入水使每支比色管中的液體總體積為5?mL；

（2）取一支比色管，加入BR緩沖液1mL，然后加入0.1-0.5mL的DNA溶液，DNA溶液的濃度與步驟（1）DNA溶液的濃度相同，最后加入水使比色管中的液體總體積為5?mL；