[發明專利]氧化分解后的白朮揮發油的HPLC指紋圖譜的建立方法

無效

• 申請號: 201210254120.5
• 申請日: 2012-07-23
• 公開（公告）號: CN102798686A
• 公開（公告）日: 2012-11-28
• 發明（設計）人: 閻克里
• 申請（專利權）人: 山西省腫瘤醫院
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 太原科衛專利事務所(普通合伙) 14100
• 代理人: 朱源

技術領域

????本發明涉及一種中藥材中抗癌有效成分指紋圖譜的建立方法，具體是一種氧化分解后的白朮揮發油的高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜的建立方法，屬于藥物分析技術領域。?

背景技術

白朮為臨床常用中藥之一，為菊科植物白朮(Atractylodes?macrocephala?Koid.)的干燥根莖，主產于浙江、安徽等地。白朮揮發油是白朮抗腫瘤活性部位，在白朮中約含1.4%，揮發油中約含40種不同化學物質，含量最高的成分是蒼術酮，占揮發油總量的60%。?

目前，多采用氣相色譜法對白朮揮發油中的化學成分及其相對含量進行分析。但是，白朮揮發油與其他藥材揮發油明顯不同，白朮揮發油中蒼朮酮的性質不穩定，易發生氧化分解，采用氣相色譜對白朮揮發油進行分析測定過程中，測定程序的升溫過程會對揮發油中不穩定成分及蒼朮酮的穩定造成影響，氧化分解前、后的GS-MS色譜圖明顯不同。查閱文獻可知，有采用HPLC法，對氧化分解前白朮揮發油中單一成分—蒼朮酮的定量分析；在指紋圖譜的研究中，有報道采用GS法探討了不同提取方法得到的揮發油其色譜結果差異；采用直觀推導式演進特征投影算法，比較不同產地白朮揮發油GS-MS數據，以白朮揮發油質控表征白術藥材的質量控制；采用高效毛細管電泳法比較了不同產地白朮藥材指紋圖譜差異，建立白朮藥材指紋圖譜分析方法。?

目前白朮揮發油藥用研究主要是集中在氧化分解前的白朮揮發油，焦點是如何阻止其中含量多、性質不穩定成分—蒼朮酮的氧化分解。但是上述對氧化分解前白朮揮發油的質量評價方式單一，不足以系統、全面的表明氧化分解后的白朮揮發油的整體質量，亟需探索可全面反映氧化分解后的白朮揮發油質量的標準控制手段。?

發明內容

本發明旨在提供一種氧化分解后的白朮揮發油的高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜的建立方法，為氧化分解后的白朮揮發油的藥用原料、產品生產工藝流程中的各個步驟的質量控制提供依據。?

本發明是通過以下技術方案實現的：氧化分解后的白朮揮發油的HPLC指紋圖譜的建立方法，所述的氧化分解后的白朮揮發油為：由白朮藥材中提取得到的白朮揮發油經氧化分解后，其中蒼朮酮的分解率達100%的白朮揮發油，所述的建立方法包括以下步驟：?

（1）供試品溶液的制備：精密稱取氧化分解后的白朮揮發油供試品，用乙腈溶解配制成1.5mg·mL^-1的溶液，此溶液為供試品溶液；

（2）混合對照品溶液的制備：用乙腈溶解精密稱取的蒼朮酮、β-桉葉醇、白朮內酯Ⅰ、白朮內酯Ⅲ，制得混合溶液A；精密稱取β-欖香烯，用體積比為1:1的乙腈-乙酸乙酯的溶液溶解，配制成濃度為100μg·mL^-1的溶液B；混合溶液A中加入溶液B，再加入乙腈，配制成蒼朮酮0.60mg·mL^-1、β-桉葉醇0.40mg·mL^-1、白朮內酯Ⅰ50μg·mL^-1、白朮內酯Ⅲ40μg·mL^-1、β-欖香烯20μg·mL^-1的混合對照品溶液；

（3）指紋圖譜的制作：

色譜條件：Hypersil?ODS2色譜柱，4.6mm×250mm，5μm；檢測波長200nm～240nm，流動相流速為1.0mL·min^-1，柱溫為室溫；流動相A為乙腈，流動相為B為水，流動相A與B的體積比為60:40，采用線性梯度洗脫方式：0-30min，40%B→10%B；30-45min，10%B→10%B；

在上述色譜條件下，精密吸取供試品溶液和混合對照品溶液各5μl進樣量，進行高效液相色譜分析，得到氧化分解后的白朮揮發油的指紋圖譜。

由白朮中提取得到的白朮揮發油的氧化分解可通過多種方式，例如室外光照及室外非光照下放置，室內適宜溫度加熱或室內放置等。本發明所述的氧化分解的方式：由白朮中提取得到的白朮揮發油的氧化分解是通過將白朮揮發油置于密閉、透光的玻璃容器中，并將玻璃容器置于室外非光照條件下進行氧化分解。本發明所述的氧化分解方式使得白朮揮發油中的不穩定成分完全氧化分解，氧化分解后的白朮揮發油各成分相對穩定。?

所述的指紋圖譜建立方法中進行高效液相色譜分析時，最佳采樣時間為40min。?

????所述的白朮揮發油中的蒼朮酮的分解率的檢測是采用高效液相色譜檢測的，所述的檢測方法為：?