[發明專利]土霉素，普羅帕酮和安乃近的抗腫瘤作用

在審

• 申請號: 201210251287.6
• 申請日: 2012-07-10
• 公開（公告）號: CN103536607A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發明（設計）人: 邵金輝
• 申請（專利權）人: 邵金輝
• 主分類號: A61K31/65
• 分類號: A61K31/65;A61K31/4152;A61K31/138;A61P35/00
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技術領域

本發明涉及三種藥物的抗腫瘤作用的新功能。具體地說，本發明涉及三種非臨床抗腫瘤藥物，被發現具有抗腫瘤作用，主要是能夠顯著抑制肺癌A549細胞或者子宮頸癌Hela細胞的增殖。

背景技術

臨床試驗是新藥研制的最后一環，它需要花費巨資資金。老藥新用，特別是發現經過長期臨床實踐應用的“老藥”具有新用途的意義十分巨大，其價值絕不低于發現一種新藥。目前幾乎沒有一種藥物能達到完全治愈肺癌或者宮頸癌等癌癥患者的功能，因此，尋找一種有效的、特異的、毒副作用小的新型抗腫瘤藥物是至關重要的。

很多老藥的新用途都是臨床醫生在臨床實踐中發現的，具有較大的偶然性。如果有意識，有計劃地檢測一些臨床用藥的新用途，就可能更快地，更多地發現它們的新用途，應用于臨床，會緩解甚至解除患者的病痛，會產生很大的社會效益和經濟效益。這是一種有效的和節儉的發現新藥的途徑。

土霉素(oxytetracycline)，普羅帕酮(propafenone)和安乃近(metamizol；dipyrone)等藥物都是非臨床抗腫瘤藥物，利用肺腺癌A549細胞和子宮頸癌Hela細胞篩選這些臨床用藥，可能發現它們抗腫瘤作用的新用途。

發明內容

在本發明中在國際上首次發現土霉素，普羅帕酮和安乃近這些非臨床抗腫瘤藥物，具有抗腫瘤作用。具體說，土霉素，普羅帕酮和安乃近都能夠顯著抑制肺腺癌A549細胞的增殖，而只有普羅帕酮能夠顯著抑制子宮頸癌Hela細胞的增殖。

土霉素，普羅帕酮和安乃近對肺癌A549細胞或者子宮頸癌Hela細胞生存率的抑制作用。使用濃度為0.005g/L至0.2g/L的土霉素，普羅帕酮或安乃近，分別處理肺癌A549細胞或者子宮頸癌Hela細胞48h，應用SRB方法檢測細胞存活率，結果顯示，普羅帕酮能夠以濃度依賴的方式顯著抑制子宮頸癌Hela細胞的生存率，而土霉素和安乃近抑制作用不顯著(圖1A)。這三種藥物都能夠以濃度依賴的方式顯著抑制肺癌A549細胞的生存率(圖1B)。通過測到的細胞生存率，計算半數生長抑制濃度(IC₅₀)，結果在表1中。

土霉素，普羅帕酮和安乃近對肺癌A549細胞或者子宮頸癌Hela細胞形態的影響。當使用濃度大于0.014g/L的普羅帕酮處理子宮頸癌Hela細胞48h后，應用倒置顯微鏡觀察，與對照組相比，細胞數量明顯減少，出現細胞變圓，破碎等現象。當使用濃度分別為0.1，0.02，or?0.1g/L的土霉素，普羅帕酮和安乃近處理肺癌A549細胞48h后，與對照組相比，細胞數量明顯減少，也出現細胞變圓，破碎等現象(圖2)。

土霉素，普羅帕酮和安乃近對肺癌A549細胞或者子宮頸癌Hela細胞LDH活性的影響。分別使用濃度為0.1g/L，0.02g/L?or?0.1g/L的土霉素，普羅帕酮和安乃近處理A549細胞或者Hela細胞48h，以濃度為0.1％的DMSO處理組作為對照組，檢測各實驗組以及對照組的LDH值。通過對各實驗組與對照組的LDH值進行統計學分析比較，結果顯示各組間無顯著性差異，表明這些藥物抑制這些腫瘤細胞的增殖，不是通過化學刺激等促進細胞壞死的途徑發揮作用的(圖3)。

土霉素，普羅帕酮和安乃近誘導肺癌A549細胞或者子宮頸癌Hela細胞的凋亡。當使用濃度為0.014g/L或者更高的普羅帕酮處理Hela細胞48h后，應用Hoechst?33258檢測細胞凋亡。結果顯示，普羅帕酮能夠顯著促進Hela細胞的凋亡(圖4)。說明普羅帕酮主要是通過促進細胞凋亡，發揮抑制Hela細胞增殖的作用。當使用濃度為0.014g/L的普羅帕酮，或者濃度為0.1g/L土霉素和安乃近處理A549細胞48h后，應用Hoechst?33258檢測細胞凋亡。結果顯示，土霉素和安乃近都能夠顯著促進A549細胞的凋亡，而普羅帕酮不能夠顯著促進A549細胞的凋亡。說明土霉素和安乃近主要是通過促進細胞凋亡，發揮抑制A549細胞增殖的作用，而普羅帕酮不是主要通過促進細胞凋亡，而是通過阻滯細胞周期等途徑發揮抑制A549細胞增殖的作用。

本發明使醫療界首次認識到，土霉素，普羅帕酮和安乃近，這三種藥物都能夠以濃度依賴的方式顯著抑制肺癌A549細胞的增殖。普羅帕酮能夠以濃度依賴的方式顯著抑制子宮頸癌Hela細胞的增殖。