[發(fā)明專利]一種寡聚核酸分子及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210249947.7
• 申請日: 2012-07-19
• 公開（公告）號: CN103571827A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 杜權(quán)
• 申請（專利權(quán)）人: 杜權(quán)
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域。更具體地說，本發(fā)明涉及一種用于小分子RNA分離的寡聚核酸分子、利用該寡聚核酸分子分離小分子RNA的方法及用于該方法的試劑盒。

背景技術(shù)

目前，小分子RNA-100個(gè)核苷酸或更小的RNA分子是極為引人關(guān)注的領(lǐng)域，并且在分子治療領(lǐng)域很有前途。這些小分子RNA主要包括微小RNA分子(microRNA，簡寫做miRNA)和小干擾RNA分子(small?interfering?RNA，簡寫做siRNA)，由于這兩種RNA分子都能夠與靶mRNA雜交，所以能夠調(diào)節(jié)基因表達(dá)。在不同的組織、器官和不同的發(fā)育時(shí)期，miRNA和/或siRNA的表達(dá)是不同的，它們可能在各種生物發(fā)育、生理活動、疾病發(fā)生過程中起重要的調(diào)節(jié)作用。這些小分子RNA的錯誤表達(dá)會導(dǎo)致腫瘤、自身免疫性疾病等的發(fā)生。因此，對這些小分子RNA的研究，尤其是對它們的定量研究將對它們的生物功能的研究起到重要推動作用。

但是，以目前廣泛進(jìn)行的miRNA的研究為例，無論是Northern?blot、miRNA克隆還是實(shí)時(shí)定量PCR方法，都是使用總RNA作為樣品。由于成熟的miRNA分子產(chǎn)生于miRNA前體，與其前體具有共同的序列，因此使用總RNA進(jìn)行研究必然導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。中國專利申請200480025190.7采用固相支持物如硅膜等吸附的方式分離小分子RNA。中國專利申請200810036769.3公開了一種通過分子篩方法分離小分子核酸的方法，該方法使得具有相同或相近似分子量的核酸分子一起被分離。上述方法雖然可以分離到小分子RNA，但是通常得到的產(chǎn)物中還混雜有其他非靶RNA。

對于miRNA研究來說，一個(gè)關(guān)鍵問題就是特異性分離得到這些小分子RNA。因此，本領(lǐng)域仍需提供一種高效特異的分離小分子RNA的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種用于小分子RNA分離的寡聚核酸分子，通過與特異性的小分子RNA互補(bǔ)配對，實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)RNA分子的分離。

本發(fā)明涉及以下按順序編號的段落中定義的主題：

1、一種用于小分子RNA分離的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子由連續(xù)的兩段核酸序列構(gòu)成，其中第一核酸序列為一發(fā)夾結(jié)構(gòu)的通用序列，其3’端區(qū)域與第二核酸序列的3’端區(qū)域完全或部分互補(bǔ)；第二核酸序列由5’端區(qū)域和3’端區(qū)域組成，其5’端區(qū)域與待分離的小分子RNA序列完全或部分互補(bǔ)，其3’端區(qū)域與第一片段的3’端區(qū)域完全或部分互補(bǔ)。

2、一種用于小分子RNA分離的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子由連續(xù)的兩段核酸序列構(gòu)成，其中第一核酸序列為一發(fā)夾結(jié)構(gòu)的通用序列，其3’端區(qū)域與第二核酸序列的3’端區(qū)域完全或部分互補(bǔ)，第一核酸序列與一種可篩選標(biāo)記物連接，可篩選標(biāo)記物可標(biāo)記在寡聚核酸分子的中間位置或末端位置；第二核酸序列由5’端區(qū)域和3’端區(qū)域組成，其5’端區(qū)域與待分離的小分子RNA序列完全或部分互補(bǔ)，其3’端區(qū)域與第一片段的3’端區(qū)域完全或部分互補(bǔ)。

3、段落1-2任一項(xiàng)所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子為包含至少一個(gè)核糖核苷酸(RNA)分子的雜合分子。

4、段落1-3任一項(xiàng)所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述第二核酸序列的5’端區(qū)域和3’端區(qū)域之間無間隔序列。

5、段落1-3任一項(xiàng)所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述第二核酸序列的5’端區(qū)域和3’端區(qū)域之間包含至少一個(gè)堿基的間隔序列。

6、段落1-5任一項(xiàng)所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子為包含化學(xué)修飾的寡聚核酸分子，所述修飾為如下的修飾中的至少一種：

(1)對所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中核糖的修飾；

(1)對所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中連接核苷酸的磷酸二酯鍵的修飾；

(3)對所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中堿基的修飾。

7、段落6所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述修飾為對所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中核糖的2’-OH的修飾。

8、段落6-7任一項(xiàng)所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述修飾為所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中核糖的2’-OH被甲氧基或氟取代。

9、段落1-8任一項(xiàng)所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子中包含至少一個(gè)鎖核酸(LNA)分子。