[發(fā)明專利]抗高血壓活性肽VIP

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210247822.0
• 申請日: 2012-07-17
• 公開（公告）號: CN102786579A
• 公開（公告）日: 2012-11-21
• 發(fā)明（設計）人: 錢炳俊;張建華;鄧云;趙艷云;索庚;金雅芳;沈珊齊;薛婷;駱亞麗
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C07K5/083
• 分類號: C07K5/083;A61K38/06;A61P9/12;A23L1/29
• 代理公司: 上海旭誠知識產權代理有限公司 31220
• 代理人: 鄭立

技術領域

本發(fā)明涉及兩個抗高血壓活性肽，具體涉及一種通過構建定量構效關系（Quantitative?Structure-Activity?Relationships，QSAR）數(shù)學模型和體外和體內生物活性實驗篩選出兩個抗高血壓的合成三肽。

背景技術

我國高血壓患病率的態(tài)勢越來越嚴峻，當前常見的治療高血壓的藥物有以下六種：利尿劑（可能引起低血鉀癥，影響糖代謝，使糖耐量下降）、β－阻滯劑（可帶來中樞神經系統(tǒng)、消化系統(tǒng)以及血管系統(tǒng)的不良反應）、α－阻滯劑、鈣拮抗劑（會導致水腫、頭痛、潮紅、多尿、低血壓以及心臟傳導受阻）、血管緊張素轉換酶抑制劑（ACEI）和血管緊張素II受體阻滯劑（可引起干咳、血鉀高、甚至血管性水腫）。由于大部分藥物都有副作用，所以科學家們一直致力于開發(fā)含有抑制血管緊張素轉換酶（angiotensin?converting?enzyme，ACE,EC3.4.15.1）活性的小肽的功能食品，使高血壓患者得益。ACE酶是一種外肽酶，是調節(jié)血壓的重要因子，主要存在于血管的內皮細胞，在肺毛中含量最為豐富。根據(jù)文獻：趙海珍,陸兆新,劉戰(zhàn)民等.天然食品來源的血管緊張素轉換酶抑制肽的研究進展[J].中國生化藥物雜志,2004,25(5):315-317及文獻：陳強.血管緊張素轉換酶抑制劑和血管緊張素II受體拮抗劑聯(lián)合應用治療腎小球疾病[J].腎臟病與透析腎移植雜志,2001,10(3):274-277的報道，ACE酶的主要作用有兩個，一個是使得血管緊張素I(Ang?I)轉化為血管緊張素II(Ang?II)，另外一個是使緩激肽失活，以這兩個作用影響腎素－血管緊張素系統(tǒng)（RAS）來完成血壓的調節(jié)。血管緊張素II可以與血管組織中的特異性受體AT₁相結合，通過血流動力學作用，使得血管收縮，收縮腎小球出球小動脈，使腎血流量下降，腎小球毛細血管內壓升高，緩激肽可以通過血流動力學作用，使血管舒張，舒張腎小球出球小動脈，使腎血流量上升，腎小球毛細血管內壓降低。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術的不足，提供兩種高效低毒的抗高血壓活性肽。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明使用以下技術方案：

兩種抗高血壓活性肽，其氨基酸序列分別為：纈氨酸(Val)-異亮氨酸(Ile)-脯氨酸(Pro)（簡稱VIP）和異亮氨酸(Ile)-纈氨酸(Val)-脯氨酸(Pro)（簡稱IVP）。本發(fā)明選擇了氨基酸的疏水性和氨基酸的空間占位（以分子量為衡量基準）建立了ACE酶抑制效果(LogIC50)與乳源性抑制肽(3aa)的數(shù)學模型Y=0.560-0.540*X₁₁-0.007*X₂₁-0.054*X₁₂+0.010*X₂₂+0.696*X₁₃+0.006*X₂₃。分析抗高血壓活性肽的結構特征，如C-末端的氨基酸殘基的疏水性和其倒數(shù)第二個氨基酸的拓撲空間結構，以及結合已知的ACE抑制二肽樣本集，確定乳源抗高血壓小肽的篩選原則：C-末端具有疏水性，以Pro、Phe、Trp和Tyr為主；C-末端倒數(shù)第二個氨基酸具有較小的拓撲空間。選擇待測三肽序列，并通過構建的QSAR數(shù)學模型，對其理論LogIC₅₀值進行分析，根據(jù)其值的大小確定體內外活性檢測候選小肽序列并進行合成，其中，X_ij代表的是結構性質，其中，j＝1,2,3，代表的是乳源三肽中氨基酸的位置，i=1,2，分別代表的是氨基酸的疏水性和分子量，疏水性均取了正值來帶入方程進行運算。所選取的ACE酶抑制活性肽均取自牛奶中主要的蛋白質，所選取出的這些小肽的LogIC₅₀均為正值，即意味著具有ACE酶抑制活性，根據(jù)數(shù)學方程可知，C末端第一位氨基酸的疏水性具有重要的影響作用，因為，在所篩選出來的小肽中，首位為Ile和Val的小肽的抑制效果較好，即LogIC₅₀的值較小。從中篩選出了6個計算值比較理想的三肽分子異亮氨酸(Ile)-纈氨酸(Val)-脯氨酸(Pro)(簡稱IVP)，LogIC₅₀=0.2；異亮氨酸(Ile)-天冬酰胺(Asn)-脯氨酸(Pro)(簡稱INP)，LogIC₅₀=0.3878；異亮氨酸(Ile)-谷氨酰胺(Gln)-脯氨酸(Pro)(簡稱IQP)，LogIC₅₀=0.5278；纈氨酸(Val)-異亮氨酸(Ile)-脯氨酸(Pro)(簡稱VIP)，LogIC₅₀=0.5855；纈氨酸(Val)-亮氨酸(Leu)-脯氨酸(Pro)(簡稱VLP)，LogIC₅₀=0.6233；賴氨酸(Lys)-賴氨酸(Lys)-酪氨酸(Tyr)(簡稱KKY)，LogIC₅₀=0.674）。再通過體外和體內生物活性驗證篩選出2個抗高血壓能力最強的合成三肽IVP和VIP。