[發(fā)明專利]一種牛、羊用冷凍精液稀釋液配方及制作方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210247522.2
• 申請日: 2012-07-18
• 公開（公告）號: CN102726372A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發(fā)明（設計）人: 尹旭升;牛華星;張淑二;田寧寧;霍道坦
• 申請（專利權）人: 尹旭升
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 馮鐵惠

技術領域

本發(fā)明涉及一種牛羊用冷凍精液稀釋液配方以及制備方法。?

背景技術

稀釋液是牛、羊等精液冷凍時必不可少的組成成分，在冷凍過程中對精子起到稀釋、緩沖、營養(yǎng)和保護的作用，有效降低低溫對精子的影響。盡管國內的冷凍精液制作及人工授精技術已應用多年，但冷凍精液解凍后精子活力（35%~40%）仍低于國外水平（50%~60%）。精液在經過超低溫冷凍解凍后，精子的活力降低、死亡數(shù)量與畸形率增加，其原因是精子受冷打擊致使精子質膜結構發(fā)生改變，嚴重影響質膜的完整性及其復蘇后的精子的活力及受精能力。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種能有效提高冷凍精液解凍后精子活力，頂體完整率，降低精子畸形率的牛羊用冷凍精液稀釋液配方以及制備方法。

本發(fā)明通過在精液中加入一定量的穩(wěn)定劑及活性物質，可以有效地起到保護精子的作用。?本發(fā)明采用添加一定濃度的BSA（牛血清蛋白）及V_B12注射液可以對精子起到一定的保護作用，有效地提高精子活力及頂體完整率，降低精子畸形率。

本發(fā)明采用如下技術方案：

一種牛羊用冷凍精液稀釋液配方，每100mL稀釋液的配方為：?檸檬酸1.35~1.55g，三羥甲基氨基甲烷（tris）2.4~2.6g，葡萄糖1.0~1.2g，甘油4.5~6.8ml，卵黃18.0~21ml，牛血清白蛋白（BSA）4.5~7.5ml，維生素B₁₂?0.45~0.75ml，青霉素鉀5~10萬IU，硫酸鏈霉素5~10萬IU，余量為蒸餾水。

一種牛羊用冷凍精液稀釋液配方的制作方法，包括如下步驟：

（1）基礎液的配制：取檸檬酸、三羥甲基氨基甲烷（tris）、葡萄糖、加入蒸餾水中，配制成基礎液A；

（2）卵黃液的制備：選取新鮮雞蛋，將蛋殼消毒，在無菌條件下去蛋殼、蛋清；用已滅菌濾紙將卵黃膜表面的蛋清吸干，用無菌注射器抽取卵黃；

（3）將基礎液A過濾后，在65℃下進行巴氏消毒滅菌30分鐘，溫度低于30℃后分別加入經過滅菌的甘油、卵黃,加入牛血清白蛋白（BSA）和維生素B12，攪拌均勻，將PH值調整為6.5~7.5之間，即配制成B液；

（4）使用前，在B液中分別加入青霉素鉀及硫酸鏈霉素，即可使用。?

使用本發(fā)明配方時，可以：

1、根據(jù)原精精液量、活力及密度換算后確定所需的稀釋液添加量。本發(fā)明配方可直接加入牛的原精液中，以達到稀釋的目地。

2、對于稀釋液添加量低于100ml時，可直接將本品分多次加入牛精液中進行稀釋；若稀釋液添加量超過100ml時，可分兩次加入，初次加入原精液體積的3～5倍，后將剩余稀釋液與初步稀釋后的精液一同放入平衡柜中平衡，分裝前30分鐘，將剩余稀釋液加入精液中，再放入平衡柜中直至分裝。

本發(fā)明具有如下優(yōu)點及效果：

1、與國標稀釋液配方相比，成本低，配制以及使用操作步驟較為簡便。

2、能夠有效提高精子的活力（45%~55%）、頂體完整率（≥68%），質膜完成率（≥50%），降低精子畸形率（≤15%，其中綿羊≤18%）。

3、體外授精試驗顯示：精子穿卵能力增加145%。

4、本發(fā)明配方使用范圍較廣，在肉牛、奶牛、山羊及綿羊精液的制作中均取得良好效果，其精子活力≥45%，頂體完整率≥68%，質膜完整率（≥50%），精子畸形率≤15%（綿羊精子畸形率≤18%）。

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具體實施例

?實施例1：

（1）基礎液的配制：取檸檬酸1.353g，三羥甲基氨基甲烷（tris）2.422g，葡萄糖1.1g，加入68.5ml蒸餾水中，配制成基礎液A。

（2）卵黃液的制備：選取新鮮雞蛋，將蛋殼用75%的酒精消毒，在無菌條件下去蛋殼、蛋清；用已滅菌濾紙將卵黃膜表面的蛋清吸干，用無菌注射器抽取卵黃。

（3）將基礎液A過濾后進行巴氏消毒滅菌（65℃30分鐘），溫度低于30℃后分別加入經過滅菌的甘油5.0ml，卵黃20ml，加入6ml?牛血清蛋白（BSA）和0.5ml維生素B12，再用磁力攪拌器攪拌均勻，將PH值調整為6.5~7.5之間，即配制成B液。

（4）使用前，在B液中分別加入青霉素鉀及硫酸鏈霉素各5萬IU，即可使用。?

（5）本配方使用效果最好。

實施例2：