[發明專利]從藻類中分離制備藥用級藻藍蛋白的方法

無效

• 申請號: 201210246901.X
• 申請日: 2012-07-17
• 公開（公告）號: CN102731644A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發明（設計）人: 傅紅;閆巖
• 申請（專利權）人: 福州大學
• 主分類號: C07K14/795
• 分類號: C07K14/795;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

技術領域

本發明屬于蛋白質工程領域，具體涉及一種從藻類中分離制備藥用級藻藍蛋白的方法。

技術背景

藻類中的藻藍蛋白作為蛋白存儲單位，具有明顯的抗氧化、抗炎癥、增強機體免疫能力作用，抗輻射等活性。藻藍蛋白分離純化后，成為高度熒光性的蛋白質，可作為熒光探針等生物醫藥制劑。現有的藻藍蛋白的分離純化工藝主要包括沉淀、離心、透析、層析等過程，這一系列的方法開展困難且昂貴，并且得到的純度也不高，只適用于實驗室制備藻藍蛋白。

Ganapathi?Patil報道了一種純化C-藻藍蛋白簡單有效的新方法，其中包括雙水相萃取和離子交換色譜兩個步驟。使用高壓均質法提取粗蛋白，經過高速離心后取上清液，在雙水相萃取中，使用聚合體-無機鹽體系，聚合度4000的聚乙二醇和磷酸鉀溶液作為兩相，體積比為0.8，在pH6.0的條件下使得純度為1.18的粗提液，經過一次萃取后純度上升到了3.52，而經過3次萃取后純度達到了4.05（Ganapathi?Patil，K.?S.?M.?S.?Raghavarao．Aqueous?two?phase?extraction?for?purification?of?C-phycocyanin?[J]?．Biochemical?Engineering?Journal?，2007，34：156–164．）。

Ruperto?Bermejo等使用陰離子表面活性劑Aerosol?OT（丁二酸-2-乙基己基酯磺酸鈉，簡稱AOT）通過熒光光譜研究C-藻藍蛋白在水/AOT/異辛烷的溶解特性。結果顯示，當W₀>30%時C-藻藍蛋白溶解于反膠團中。制得的溶解于非極性溶劑中的藻藍蛋白可以替代合成燃料用于食品和化妝品中（Ruperto?Bermejo，Eva?M.?Talavera，Carmen?delValle，et?al．C-phycocyanin?incorporated?into?reverse?micelles:?a?fluorescence?study?[J]?．Colloids?and?Surfaces?B:?Biointerfaces?，2000，18：51–59．）。

劉楊研究了CTAB（十六烷基三甲基溴化銨）/正戊醇-正辛烷反膠團溶液萃取分離螺旋藻藻藍蛋白的性能。結果表明0.04?mol/L?CTAB/正戊醇-正辛烷（體積比1:4）的反膠團體系用于萃取pH7.0，包含0.1?mol/L?KCl?的螺旋藻細胞破碎液，藻藍蛋白萃取率可達96.3%；?采用pH5.0，包含?2?mol/L?KBr?的反萃液反萃取藻藍蛋白，反萃取率可達90.6%（劉楊，王雪青，龐廣昌．反膠團萃取分離螺旋藻藻藍蛋白?[J]?．天津科技大學學報，2008，6（2）：30—33．）。

Pertti?J.?Viskari等人利用3%?3-[3-（膽酰胺丙基）二甲氨基]丙磺酸（Chaps）和0.3%氮成穴大豆蛋白提取藻膽蛋白，提取率達到85%以上，并且提取全過程在3小時內完成，其產物經過毛細管電泳激光誘導熒光檢測，得到了很好的效果（Pertti?J.?Viskari，Christa?L.?Colyer．Rapid?extraction?of?phycobiliproteins?from?cultured?cyanobacteria?samples?[J]?．Analytical?Biochemistry，2003，319：263–271．）。

張厚森通過實驗室自制羥基磷灰石色譜柱對藻藍蛋白進行吸附，并通過梯度洗脫和透析脫鹽，得到了純度為2.83的藻藍蛋白。而經過兩次HA柱的藻藍蛋白純度達到4.21，總回收率為38.1%（張厚森．鈍頂螺旋藻藻藍蛋白的提取分離及穩定性研究?[D]?．江蘇：江蘇大學，2005．）。

???以上分離制備方法存在缺陷：一則可能產生較多的非食用的添加物質；二則分離純化過程中樣品的損失也較大，造成產量過低；另外大量的溶劑洗脫和多級柱分離，使分離成本大幅度提高，難以實現規模化生產。

發明內容

為了克服現有技術提取藻類藻藍蛋白產量低、成本高的不足，本發明提供了一種從藻類中分離制備藥用級藻藍蛋白的方法。

本發明采取的技術方案如下：