[發明專利]MK5基因在篩選抗肝癌藥物中的應用

無效

• 申請號: 201210246482.X
• 申請日: 2012-07-16
• 公開（公告）號: CN103540655A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發明（設計）人: 余龍;周君;萬波;王穎黎;李如偉
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/113;A61K48/00;A61P35/00;A61K31/704
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，涉及一種人MK5基因在制備抑制肝癌細胞生長藥物中的新用途。本發明還涉及人MK5基因的抑制劑及其增強阿霉素的促凋亡作用的用途。

背景技術

MK5(MAPKAPK5)蛋白激酶又名PRAK(p38-regulated/activated?protein?kinase)，由Jiahuai?Han等人于1998年首先克隆得到。MK5與MK2、MK3為同家族成員，其中MK2及MK3為p38的主要下游目標，而MK5為非典型MAPK激酶ERK3及ERK4的下游分子，同時也p38的下游目標之一。

研究表明，p38通路在腫瘤發生發展過程中同時表現出了抑制及促進的雙重作用。在皮膚癌小鼠模型中，MK5通過介導致癌基因誘導的衰老從而抑制腫瘤的發生及發展過程。進一步的研究發現，在同一小鼠模型中，當腫瘤形成后，MK5則發揮了促進皮膚癌生長的作用。實驗結果顯示，MK5也是腫瘤血管形成的重要因素之一。p38通過VEGFR2(vascular?endothelial?growth?factor?receptor2)依賴性途徑激活MK5，由此促進宿主內皮細胞向腫瘤的遷移并將此類細胞包裹入腫瘤脈管系統。

另有研究表明，原癌基因c-myc能夠直接激活MK5，并與之形成負反饋通路。在結腸癌中，MK5表達量下調，MK5與c-myc之間的負反饋通路中斷從而促進了結腸癌的發生發展。

然而，到目前為止，尚未有人報道MK5與肝癌的相互關系以及其在肝癌發生發展中發揮的作用。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種降低肝癌細胞耐藥性，增強肝癌細胞對阿霉素敏感性的藥物和方法。

本發明的實驗數據表明，通過RNA干擾抑制人MK5基因表達，可以有效地增加肝癌細胞對阿霉素的敏感性。在同時使用MK5基因的siRNA和阿霉素的情況下，肝癌細胞的凋亡比例明顯增加，肝癌細胞的增殖明顯減慢，肝癌細胞的生長受到抑制。過表達MK5基因的情況下，使用阿霉素，肝癌細胞的凋亡比例明顯下降。本發明的MK5有促進肝癌細胞抵抗阿霉素誘導的細胞凋亡的作用，可以作為新的抑制肝癌細胞生長的藥靶進行開發。MK5基因的siRNA可以作為阿霉素的增敏劑。此外，MK5基因在肝癌細胞和組織中的表達量要明顯高于癌旁組織，因此，使用MK5基因的siRNA將大大增強阿霉素對肝癌細胞的促凋亡作用，而不對癌旁細胞或者組織造成類似作用。本發明在此基礎上完成。

本發明提供了MK5基因在制備抑制肝癌細胞生長藥物中的應用，即作為篩選和制備抑制肝癌細胞生長藥物的藥靶。

本發明的人MK5基因，在NCBI（美國國立生物技術信息中心）網站中核苷酸的序列號為AF032437.1，蛋白質的序列號為AAC39863.1。

本發明的MK5有加強肝癌細胞抵抗阿霉素誘導的細胞凋亡的作用，可以作為新的抑制肝癌細胞生長的藥靶進行開發。

本發明的MK5可以根據NCBI登錄號為AF032437.1設計引物，擴增獲得MK5的DNA序列，然后根據常規基因工程方法獲得MK5蛋白。也可以通過人工合成的方法獲得MK5的基因序列和蛋白。

MK5可以用于篩選其抑制劑，從而與阿霉素聯用作為促進肝癌細胞凋亡的藥物。

MK5在肝癌細胞及肝癌組織中的表達量比其在癌旁細胞或者組織的表達量要高許多，利用MK5的siRNA作為促凋亡的藥物成分，將主要對肝癌細胞或者肝癌組織發生作用，這大大提高了藥物的特異性，降低了對正常細胞的損傷。

例如，本發明的一個實施例中篩選到MK5的siRNA。所述的MK5的siRNA的序列如SEQ?ID?NO?2所示。

本發明的MK5的siRNA可以根據SEQ?ID?NO?2所示的序列人工合成。

MK5基因的siRNA可以用于增加肝癌細胞對阿霉素的敏感性，能夠增加阿霉素促進肝癌細胞凋亡的作用。

本發明提供了一種抑制肝癌細胞生長的藥物組合物，該藥物組合物含有MK5基因的siRNA和阿霉素。該藥物組合物能夠促進肝癌細胞的凋亡。

其中，MK5基因的siRNA和阿霉素的比例為（1:1-1000，摩爾比）。例如，敲減MK5基因的siRNA和阿霉素的物質的量比例為1:5，1:10，1:50，1:100，1:200，1:300，1:500，1:1000，等等。